昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒及其使用方法，属于生物技术领域。本发明专利技术通过原核表达获得钙黏蛋白重组蛋白，将重组蛋白免疫小鼠，并通过筛选得到特异性的单克隆抗体，将钙黏蛋白重组蛋白免疫兔，得到特异性的多克隆抗体，最终开发出定量检测钙黏蛋白含量的酶联免疫定量检测试剂盒，通过检测钙黏蛋白含量来确定昆虫对Bt蛋白的抗性。该试剂盒可准确、可靠地进行钙黏蛋白的定量检测，并通过对钙黏蛋白的含量检测，来判断昆虫对Bt蛋白的抗性强弱。该试剂盒检测方便、快捷、稳定性好。

Enzyme linked immunosorbent assay kit for insect cadherin content and its application

【技术实现步骤摘要】
昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒及其使用方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
我国是农业生产大国，但是农业生产过程中会遭受各类害虫的危害，严重年份，可导致有些农作物绝收，损失达几百亿元。同时由于长期的化学农药的使用，农业害虫对化学农药的抗性严重上升，使得有些农业害虫的防治越来越困难。在这样的背景下，全世界的科学家专利技术了一种内置农药Bt(Bacillusthuringiensis)基因，其在棉花中可表达外源Bt杀虫蛋白，能有效杀死棉铃虫、红铃虫等。转基因抗虫棉的培育和大面积种植，有效的控制了棉铃虫的危害。至今我国转基因抗虫棉累计推广面积超过3亿亩，每年化学农药的使用量减少1万到1.5万吨，相当于我国化学杀虫剂年生产总量的7.5％左右，人畜中毒和环境污染大大减少，棉农的劳动强度和防治成本明显下降，捕食性天敌的数量明显增加，棉田生态环境得到明显改善，产生了显著的社会、经济和生态效益。同时也外用Bt毒素制剂进行杀虫，起到了很好的作用。但是，随着抗虫棉的种植时间的延长和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒，其特征在于，包括如下组分：/n(1)抗体预包被酶标板；/n(2)样品稀释液，即磷酸盐缓冲液；/n(3)洗涤液，即含Tween-20的磷酸盐缓冲液；/n(4)反应终止液，即H

【技术特征摘要】
1.昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒，其特征在于，包括如下组分：
(1)抗体预包被酶标板；
(2)样品稀释液，即磷酸盐缓冲液；
(3)洗涤液，即含Tween-20的磷酸盐缓冲液；
(4)反应终止液，即H2SO4溶液；
(5)酶标抗体，即辣根过氧化物酶标记的兔抗钙黏蛋白多克隆抗体；
(6)显色剂，即TMB显色剂；
(7)钙黏蛋白冻干粉标准品。


2.根据权利要求1所述的昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述(1)抗体预包被酶标板的制备过程如下：
(1)将特异性鼠抗钙黏蛋白单克隆抗体用包被缓冲液稀释到一定浓度，加至96孔酶标板，每孔100μL，4℃静置过夜包被；其中鼠抗钙黏蛋白单克隆抗体的包被浓度为1.8～2.2μg/ml；
(2)将板孔溶液甩干，加入洗涤液，浸泡5min，将板孔溶液甩干，在吸水纸上拍干；
(3)将封闭液加至96孔酶标板，每孔150μL，37℃反应2h；其中封闭液为含BSA的碳酸盐缓冲液；
(4)将板孔溶液甩干，在吸水纸上拍干，用冷冻干燥机抽干；
(5)用真空包装机包装于铝箔袋中。


3.根据权利要求2所述的昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述步骤(1)中包被缓冲液为碳酸盐缓冲液。


4.根据权利要求3所述的昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述碳酸盐缓冲液为Na2CO3-NaHCO3缓冲液，其浓度为0.1M，pH值为9.6。


5.根据权利要求2所述的昆虫钙黏蛋白含量酶联免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述步骤(1)中鼠抗钙黏蛋白单克隆抗体是通过钙黏蛋白重组蛋白免疫BALB/c...

【专利技术属性】
技术研发人员：雒珺瑜，崔金杰，朱香镇，张开心，王丽，姬继超，李东阳，张利娟，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41