【技术实现步骤摘要】
一种测定水质中大肠杆菌含量的方法
本专利技术属于微生物检测
，具体涉及一种测定水质中大肠杆菌含量的方法。
技术介绍
大肠埃希氏菌(Escherichiacoli，简称E.coli)习惯称为大肠杆菌，是人及各种动物肠道中的正常寄居菌，常随粪便从人及动物体排除，广泛散播于自然环境中，因此一旦检出大肠杆菌，即意味着样品直接或间接地被粪便污染。因此，大肠杆菌被用作饮用水、食品等的粪源性污染卫生细菌学指标。我国食品和饮用水的相关国家标准中就明确规定了大肠杆菌的检出限，其中我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的大肠杆菌标准的规定，1L水中不超过3个；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过10000个。大肠杆菌的传统检测和计数方法是MPN法(mostprobablenumber，最大可能数)，此法的基础是大肠杆菌在生长培养基上进行乳糖发酵、产气和形成吲哚，但这一方法需要6-7天的时间，已...
【技术保护点】
1.一种测定水质中大肠杆菌含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)银-大肠杆菌体系的制备/n将一定体积的菌液在一定转速和时间下，离心一次，除去上清液，然后加入一定体积的AgNO
【技术特征摘要】
1.一种测定水质中大肠杆菌含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)银-大肠杆菌体系的制备
将一定体积的菌液在一定转速和时间下，离心一次，除去上清液，然后加入一定体积的AgNO3溶液，涡旋后，引入还原剂，所述混合溶液变为墨绿色，即得银-大肠杆菌体系，并将所述混合溶液避光置于3-4℃冰箱保存备用；
(2)捕获探针的制备
取一定体积、粒径的羧基磁珠，磁力作用下水洗三次，将其置于醋酸钠缓冲液中，向其中加入定量EDC溶液进行羧基活化，加入大肠杆菌单克隆抗体，使大肠杆菌单克隆抗体连接在磁珠表面，磁力作用下水洗三次，即得捕获探针，置于3-4℃冰箱保存备用；
取一定体积所述捕获探针，加入到步骤(1)所述银-大肠杆菌体系中，室温条件下，将其摇床振荡孵育30-32分钟，磁力作用分离，得到银-大肠杆菌-磁珠体系；
(3)加入硝酸
在步骤(2)所述银-大肠杆菌-磁珠体系中加入一定体积的稀硝酸，并在磁力作用下，分离得到上清液，将所述上清液置于EP管中；
(4)检测探针的制备
采用具有增强效应的基底材料作为拉曼信号的增强基底，将带巯基且位于生物静默区的信号分子自组装于增强基底表面，即得检测探针，并将其置于3-4℃冰箱保存备用；
(5)大肠杆菌检测标准工作曲线的建立
配置不同浓度的大肠杆菌菌液，与所述捕获探针混合，并在磁力作用下分离，取适量上清液，加入稀硝酸得混合溶液，然后将所述混合溶液加入到所述检测探针中，静置10-12min后，校准拉曼光谱仪，进行拉曼测试，建立大肠杆菌浓度x与MBN信号分子在2228cm-1处的峰强度y的标准工作曲线；
(6)水质中大肠杆菌含量的测定...
【专利技术属性】
技术研发人员：白向茹，王利华，肖康飞，韩艳云，
申请(专利权)人：武汉市农业科学院，
类型：发明
国别省市：湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。