一种可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒及其使用方法，包括独立包装的MTHFR‑C677T位点特异检测液PP1、MTHFR‑A1298C位点特异检测液PP2和MTRR‑A66G位点特异检测液PP3，以及PCR反应混合液、PCR增效剂、阳性质控品和阴性质控品，该试剂盒根据不同基因扩增片段与相应的位点突变识别探针结合而在不同荧光通道产生熔解曲线峰的差异来分析多个基因多态性位点基因型，能根据需要，灵活自由的组合检测体系进而快速有效地检测单个或多个基因多态性位点。另外，特异性引物与特异性位点突变识别探针，对特异性检测提供双重保证，同时加入阴性质控，最大程度地降低了假阳性产生，能更加准确、稳定地对样品进行多态性检测。

A kit for free combination detection of MTHFR and MTRR gene sequences and its application

【技术实现步骤摘要】
一种可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒及其使用方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种可自由组合用于检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
叶酸在人体内经叶酸还原酶作用,还原成具有生理活性的四氢叶酸，四氢叶酸作为细胞内一碳单位的载体，参与嘌呤和嘧啶合成，为DNA和蛋白质的甲基化提供甲基。科学研究证实并且机理研究清楚的与甲基类维生素(叶酸及维生素B12)代谢密切相关的基因是5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)。MTHFR主要作用是在叶酸代谢通路中将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。5-甲基四氢叶酸可以进一步进入甲基传递通路，通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平。亚甲基四氢叶酸还原酶催化5,10-亚甲基四氢叶酸转换成5-甲基四氢叶酸盐，使之能为同型半胱氨酸提供甲基形成甲硫氨酸。该酶是人体叶酸代谢中的一个重要的酶。MTHFR基因的缺本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒，其特征在于：包括独立包装的MTHFR-C677T位点特异检测液PP1、MTHFR-A1298C位点特异检测液PP2和MTRR-A66G位点特异检测液PP3，以及PCR反应混合液、PCR增效剂、阳性质控品和阴性质控品；所述位点特异检测液PP1包括MTHFR-C677T位点特异引物和MTHFR-C677T位点突变识别探针，所述位点特异检测液PP2包括MTHFR-A1298C位点特异引物和MTHFR-A1298C位点突变识别探针，所述位点特异检测液PP3包括MTRR-A66G位点特异引物和MTRR-A66G位点突变识别探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒，其特征在于：包括独立包装的MTHFR-C677T位点特异检测液PP1、MTHFR-A1298C位点特异检测液PP2和MTRR-A66G位点特异检测液PP3，以及PCR反应混合液、PCR增效剂、阳性质控品和阴性质控品；所述位点特异检测液PP1包括MTHFR-C677T位点特异引物和MTHFR-C677T位点突变识别探针，所述位点特异检测液PP2包括MTHFR-A1298C位点特异引物和MTHFR-A1298C位点突变识别探针，所述位点特异检测液PP3包括MTRR-A66G位点特异引物和MTRR-A66G位点突变识别探针。


2.根据权利要求1所述的可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒，其特征在于：所述MTHFR-C677T位点特异引物的上下游引物序列为SEQIDNO.1和SEQIDNO.2，位点突变识别探针的序列为SEQIDNO.3；所述MTHFR-A1298C位点特异引物的上下游引物序列为SEQIDNO.4和SEQIDNO.5，位点突变识别探针的序列为SEQIDNO.6；所述MTRR-A66G位点特异引物的上下游引物序列为SEQIDNO.7和SEQIDNO.8，位点突变识别探针的序列为SEQIDNO.9。


3.根据权利要求2所述的可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒，其特征在于：所述MTHFR-C677T、MTHFR-A1298C、MTRR-A66G位点上下游引物浓度比为1:5-1:10。


4.根据权利要求2所述的可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒，其特征在于：所述MTHFR-C677T、MTHFR-A1298C、MTRR-A66G位点突变识别探针的5'端标记有荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。


5.根据权利要求1所述的可自由组合检测MTHFR和MTRR基因序列的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应混合液包括PCR缓冲液，Mg2+1.5mM-3.5mM，dNTPs0.4mM-0.8mM，exTaqDNA聚合酶1U-1.5U。


6.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡茂秀，俞超，
申请(专利权)人：青岛智博生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37