无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其应用，所述活性物的制备步骤包括：S1、白子菜醇提物制备：取白子菜的根或茎为原料，洗净，粉碎，以65～85％浓度的乙醇溶液为提取溶剂，料液比为1:5～10，经加热回流法，除去乙醇后经浓缩制备得醇提物；S2、发酵：以接种量为10％将经二级培养的黑柄炭角菌接种到30L发酵罐中，往发酵罐中添加上述醇提物，在25℃～30℃下发酵40～80h，得发酵滤液；S3、取所述发酵滤液，经超滤膜过滤，得发酵活性物。本发明专利技术采用黑柄炭角菌生物发酵白子菜醇提物显著降低了其对皮肤的刺激性，其刺激强度从中刺激性降低至无刺激性，且经过黑柄炭角菌发酵后赋予了活性物较好的保湿性能，可作为一种美白、保湿、无刺激的活性成分应用于化妆品的制备中。

Preparation and application of non irritant bioactive compounds from Brassica chinensis

【技术实现步骤摘要】
无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其应用
本专利技术涉及化妆品
，特别是涉及无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其在制备具有美白、保湿功效的无刺激化妆品和/或护肤品中的应用。
技术介绍
白子菜(GynuradivaricataDC)为菊科土三七属植物，又名白背三七、降糖草等，被广泛地用于治疗高血脂、糖尿病，例如可参见中国专利技术专利申请CN102631391A、CN104644734A和CN110279873A。目前应用最多的是白子菜的地上部分，白子菜的地上部分提取物含有许多组分，已知的白子菜的地上部分提取物的化学组分主要含有生物碱类、黄酮类、三萜类、甾醇类、核苷类、酚酸类和酯类等。有学者对白子菜不同药用部位挥发油含量进行了分析，鉴别出多种化学成分，其中根、茎和叶部位的挥发油中石竹烯、大叶香烯D等的含量最高。目前，有专利技术人尝试将白子菜的醇提物与牡丹花蕊黄酮、枇杷叶黄酮、珍珠粉、鳄梨树油和淘米水形成一种防衰老面膜(CN108703936A)，然而，该抗衰老功能是各组分协同达到的效果，白子菜醇提取物在其中代表着怎样的生物活性无法确定，目前，亦未见将白子菜相关提取物用于美白的用途。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的是提供无刺激性的白子菜活性物的制备方法及其在制备美白、保湿、无刺激化妆品和/或护肤品中的应用，经试验发现，该活性物通过抑制酪氨酸酶活性达到美白的功效，同时通过本专利技术特殊方法制备的活性物对皮肤的刺激性小，刺激强度等级为无刺激。本专利技术的专利技术人在开发新的美白活性成分的过程中，意外发现白子菜水提物和醇提物均表现出较佳的美白活性(0.1mg/mL的提取物酪氨酸酶抑制率均达到50％以上)，尤其是醇提物(0.1mg/mL80％醇提物酪氨酸抑制率为64.48％)。但同时在皮肤刺激性试验中也发现，无论是醇提物和水提物，均对皮肤产生了较大的刺激(醇提物＞水提物)，多次皮肤刺激实验显示，两种提取物刺激强度为中刺激性，且刺激性随着乙醇溶液的增加而增大。因此，白子菜提取物类美白产品开发的难点主要在于如何降低白子菜提取物对皮肤的刺激性。本专利技术专利技术人通过大量的试验研究发现，白子菜提取物存在的刺激性可能是因为其中存在的石竹烯，由于石竹烯氧化后对皮肤有较大的刺激性，容易导致过敏，因此对皮肤产生了较大的刺激性。而醇提物中含有比水提物更多的石竹烯，因此刺激性更大。进一步研究发现，石竹烯之所以容易过敏可能是因为石竹烯的双键容易被氧化，而形成的过氧化物性质很不稳定，形成了对皮肤的刺激。由此，在上述背景下，本专利技术提出以下技术方案：一种无刺激性的白子菜活性物的制备方法，包括以下步骤：S1、白子菜醇提物制备：取白子菜的根或茎为原料，洗净，粉碎，以65～85％浓度的乙醇溶液为提取溶剂，料液比为1:5～10，经加热回流法，除去乙醇后经浓缩制备得醇提物；S2、发酵：以接种量为10％将经二级培养的黑柄炭角菌接种到30L发酵罐中，往发酵罐中添加醇提物，在25℃～30℃下发酵40～80h，得发酵滤液；S3、取所述发酵滤液，经超滤膜过滤，即得所述无刺激性的活性物。进一步地，所述步骤S1中，所述乙醇溶液的浓度为80％；和/或所述料液比为1:8；和/或所述提取温度为60～85℃；和/或所述粉碎是指将白子菜的根或茎粉碎成粒度为30～60目的粉末。进一步地，所述步骤S1中，所述提取温度为70℃；和/或将白子菜的根或茎粉碎成粒度为40目的粉末。进一步地，所述步骤S2发酵过程中采用的发酵培养基组成为：葡萄糖60～80g/L、蛋白胨5～10g/L、柠檬酸1～3g/L、硫酸镁1～3mg/L和硫酸锌1～2mg/L，pH为5.0～6.0。进一步地，所述步骤S2中醇提物的加入量为1～15％。进一步地，所述步骤S2中发酵温度为25℃，发酵时间为60h。进一步地，所述步骤S2发酵过程中，搅拌速度为100～200rpm，通气量为1～4vvm，罐压为0.03～0.05MPa。本专利技术还提供所述的活性物在制备具有美白、保湿功效的无刺激化妆品和/或护肤品中的应用。除此之外，本专利技术还提供了一种护肤品和/或化妆品，其含有如权利要求1～8任一所述的无刺激性的活性物。为了降低白子菜醇提物的刺激性，本专利技术采用黑柄炭角菌对其进行发酵，黑柄炭角菌[Xylarianigripes(KI)Sacc.]属于囊菌亚门、炭角菌目，炭角菌科，炭角菌属。在发酵中，众所周知菌种的选择至关重要，而黑柄炭角菌相比其他菌种的优势在于：白子菜醇提物经发酵后，刺激性大幅度降低(刺激强度从中刺激性降低到无刺激性)，且赋予了活性物优异的保湿性，这是其他菌种没有的优势。而进一步推测认为，白子菜醇提物刺激性降低的原因可能在于具有增敏性质的石竹烯在发酵过程中，最终形成了性质更加稳定、低致敏性的氧化产物，或者是黑柄炭角菌在复杂的发酵过程中产生了对抗白子菜提物刺激性的物质，最终使得活性物对皮肤的刺激性大大降低，而由于实验发现采用裂褶菌发酵并无较大降低刺激的作用，推测这种降低作用大概率与菌种种类有关，因此黑柄炭角菌降低白子菜醇提物刺激性的缘由更大概率是后者。目前未见采用黑柄炭角菌进行发酵白子菜醇提物的例子。因此，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用黑柄炭角菌发酵白子菜醇提物显著降低了其对皮肤的刺激性，其刺激强度从中刺激性降低至无刺激性，且经过黑柄炭角菌发酵后赋予了活性物较好的保湿性能，可作为一种美白、保湿、无刺激活性成分应用于化妆品的制备中。具体实施方式以下通过实施例形式的具体实施方法，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下实施例。实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例一、白子菜醇提物的制备取白子菜的根为原料，洗净，粉碎成粒度为40目的粉末，加入粉末总量8倍量的80％浓度的乙醇溶液，加热回流提取2次，每次1.5h，提取温度为70℃，过滤，合并滤液，减压除去乙醇，浓缩即得。按照上述方法，采用75％和65％浓度的乙醇溶液提取，分别得到75％乙醇提取物和65％乙醇提取物。实施例二、白子菜水提物制备取白子菜的根为原料，洗净，粉碎成40目的粉末，加入粗粉总量8倍量的温度为80℃的热水浸提2次，每次6h，过滤，合并滤液，浓缩，即得。实施例三、白子菜醇提物和水提物的美白活性及刺激性比较3.1美白活性比较各组样品用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(pH6.8，0.05mol/L)稀释为多级浓度样品，取各浓度样品于玻璃试管中，分别加入酪氨酸酶溶液；于30℃水浴反应10min，依次往各组玻璃试管中加入左旋多巴溶液，然后于30℃水浴反应10min，475nm下测其OD值，实验体系如表1。式中：T为样品管吸光值，即样品与酪氨酸酶反应后溶液吸光值；T0为样品本底吸光值；C为酶反应管吸光值3次平均值，即未加样品时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无刺激性的白子菜活性物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、白子菜醇提物制备：取白子菜的根或茎为原料，洗净，粉碎，以65~85%浓度的乙醇溶液为提取溶剂，料液比为1:5~10，经加热回流法，除去乙醇后经浓缩制备得醇提物；/nS2、发酵：以接种量为10%将经二级培养的黑柄炭角菌接种到30L发酵罐中，往发酵罐中添加白子菜醇提物，在25℃~30℃下发酵40~80h，得发酵滤液；/nS3、取所述发酵滤液，经超滤膜过滤，即得所述无刺激性的活性物。/n

【技术特征摘要】
1.一种无刺激性的白子菜活性物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、白子菜醇提物制备：取白子菜的根或茎为原料，洗净，粉碎，以65~85%浓度的乙醇溶液为提取溶剂，料液比为1:5~10，经加热回流法，除去乙醇后经浓缩制备得醇提物；
S2、发酵：以接种量为10%将经二级培养的黑柄炭角菌接种到30L发酵罐中，往发酵罐中添加白子菜醇提物，在25℃~30℃下发酵40~80h，得发酵滤液；
S3、取所述发酵滤液，经超滤膜过滤，即得所述无刺激性的活性物。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述乙醇溶液的浓度为80%；和/或所述料液比为1:8；和/或所述提取温度为60~85℃；和/或所述粉碎是指将白子菜的根或茎粉碎成粒度为30~60目的粉末。


3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述提取温度为70℃；和/或将白子菜的根或茎粉碎成粒度为40目的粉末。

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【专利技术属性】
技术研发人员：陈广文，
申请(专利权)人：广州清淞泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44