一种脐血造血干细胞体外扩增的方法技术

本发明专利技术公开了一种脐血造血干细胞体外扩增的方法，包括人脐血单个核细胞分离收集、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞包装及回收、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞培养、造血干祖细胞检测、实验数据统计学分析。本发明专利技术的有益效果是：利用藻酸盐三维培养系统体外扩增人脐血造血干祖细胞，三维培养体系模拟骨髓微环境而设计，利用藻酸盐二维培养体系，包装脐血单个核细胞,培养于培养皿静止系统和旋转培养系统中；通过改变扩增脐血造血干祖细胞的培养环境和下调脐血干祖细胞细胞周期负向调控分子,达到或部分达到了扩増脐血造血干祖细胞的目的，其中三维藻酸盐培养系统对脐血干祖细胞的扩増达到理想结果，对实现脐血干细胞更高转化效率打下了很好的基础。

A method of ex vivo expansion of cord blood hematopoietic stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种脐血造血干细胞体外扩增的方法
本专利技术涉及一种细胞扩增方法，具体为一种脐血造血干细胞体外扩增的方法，属于细胞培养扩增

技术介绍
造血干细胞是成体干细胞的一种，作为造血系统的干细胞,造血干细胞分裂时一个子细胞自我复制，用以维持造血干细胞池的稳定；另一个子细胞分化发育成造血系统的祖细胞，进一步生成各系列血细胞和所有的免疫细胞；造血干细胞移植是最早，也是目前最成熟的应用于临床的成体干细胞移植技术。自体和异基因造血干细胞移植已成功应用于血液系统肿瘤、血液系统遗传性疾病和自体免疫性疾病的治疗.其中异基因造血干细胞移植是目前根治血液系统遗传性疾病和恶性肿瘤的唯一方法。目前临床上用以移植的造血干细胞有三种来源，分别对应骨ftl移植、外周血造血干细胞移植和脐血移植作为造血干细胞的来源，脐血相比骨髓和经动员的外周血有下列优点:一，脐血的采集对供者（包括产妇和新生儿）都没有损伤；二,脐血来源的造血干祖细胞接受的外来抗原刺激少，细胞相对处于更自然的初始细胞状态，因此脐血造血干细胞移植对供患者HLA配型要求不甚严格,通常6个位点符合4个位点以上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐血造血干细胞体外扩增的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤一、人脐血单个核细胞分离收集，釆集人脐血样本，在釆集后6个小时之内进行单个核细胞的分离，将分离后的单个核细胞保存到低温环境中进行收集，并直接用于培养；/n步骤二、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞包装及回收，将藻酸盐三维微球包装于人脐血单个核细胞上，新鲜或解冻后的脐血单个核细胞重悬于1.1%藻酸盐溶液核1.1%明胶溶液，混勾后，单个核细胞-藻酸盐溶液混合物通过27-g针头逐滴滴入100m氯化钙溶液中，固态微球即可形成；/n步骤三、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞培养，将包装后的三维藻酸盐人脐血单个核细胞微球培养于静止培养皿和选装培养...

【技术特征摘要】
1.一种脐血造血干细胞体外扩增的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、人脐血单个核细胞分离收集，釆集人脐血样本，在釆集后6个小时之内进行单个核细胞的分离，将分离后的单个核细胞保存到低温环境中进行收集，并直接用于培养；
步骤二、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞包装及回收，将藻酸盐三维微球包装于人脐血单个核细胞上，新鲜或解冻后的脐血单个核细胞重悬于1.1%藻酸盐溶液核1.1%明胶溶液，混勾后，单个核细胞-藻酸盐溶液混合物通过27-g针头逐滴滴入100m氯化钙溶液中，固态微球即可形成；
步骤三、藻酸盐三维微球脐血单个核细胞培养，将包装后的三维藻酸盐人脐血单个核细胞微球培养于静止培养皿和选装培养装置中，进行系统细胞因子组合适合浓度的研究，经培养后形成实验培养基；
步骤四、造血干祖细胞检测，将形成实验培养基移植给N0D/SCID小鼠进行分组对比试验和人源性造血克隆形成实验，并利用流式细胞仪开展数据检测；
步骤五、实验数据统计学分析，对所获得的实...

【专利技术属性】
技术研发人员：程志远，王小龙，张雪梅，陈乐，李欢欢，
申请(专利权)人：河南省银丰生物工程技术有限公司，银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41