【技术实现步骤摘要】
人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的GluN1/GluN2A四聚体的表达及其应用
本专利技术属于生物
，更具体地，本专利技术涉及膜蛋白N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受体的GluN1/GluN2A四聚体的重组表达载体构建、表达纯化方法、及其作为抗原应用基于抗原-抗体结合原理，用于抗NMDA抗体检测的应用。
技术介绍
N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受体是一类广泛存在于大脑兴奋性突触中的离子型谷氨酸受体。NMDA受体对钙离子具有高通透性，并在突触传递及突触可塑性中扮演重要作用，是学习和记忆的重要分子开关。其功能异常可引起一系列中枢神经系统疾病，包括中风、抑郁症、慢性疼痛、精神分裂症及阿尔兹海默症等，因此NMDA受体是药物设计靶点之一。NMDA受体通常组成异源四聚体膜蛋白，由两个必需GluN1和两个可变GluN2(2A到2D四类亚型)亚基组成。每个亚基由胞外的N末端结构域(N-TerminalDomain，简称NTD)和激动剂结合结...
【技术保护点】
1.人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体，其特征在于，其包括选自下组的亚单位突变体或其聚合体：/n(a)亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体，其对应于SEQ ID NO:1，第612位突变为精氨酸；/n(b)亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体，其对应于SEQ ID NO:2，第656-657位突变为精氨酸；/n(c)包含(a)所述的亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体和(b)所述的亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体的聚合体。/n
【技术特征摘要】
1.人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体，其特征在于，其包括选自下组的亚单位突变体或其聚合体：
(a)亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体，其对应于SEQIDNO:1，第612位突变为精氨酸；
(b)亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体，其对应于SEQIDNO:2，第656-657位突变为精氨酸；
(c)包含(a)所述的亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体和(b)所述的亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体的聚合体。
2.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，其还包括选自下组的亚单位突变体或其聚合体：
(d)将(a)或(b)突变体的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)蛋白功能的由(a)衍生的蛋白，但对应于SEQIDNO:1的第612位或SEQIDNO:2的第656-657位的氨基酸为精氨酸；
(e)与(a)或(b)的突变体的氨基酸序列有80％以上同源性且具有(a)蛋白功能的由(a)衍生的蛋白，但对应于SEQIDNO:1的第612位或SEQIDNO:2的第656-657位的氨基酸为精氨酸；
(f)包含选自(a)、(d)-(e)任一所述的亚单位GluN1跨膜及胞外区突变体和(b)、(d)-(e)任一所述的亚单位GluN2A跨膜及胞外区突变体的聚合体。
3.如权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述的聚合体为四聚体；较佳地为：两个GluN1亚单位突变体、两个GluN2A亚单位突变体构成的四聚体。
4.分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1～3任一所述的突变体。
5.一种表达构建体或载体，其特征在于，它含有权利要求4所述的多核苷酸。
6.如权利要求5所述的表达构建体或载体，其特征在于，所述的载体为适合真核细胞表达的杆状病毒载体。
7.如权利要求5所述的表达构建体或载体，其特征在于，其含有权利要求4所述的多核苷酸，以及与之操作性连接的：3C蛋白酶编码基因，报告基因，和/或纯化标签编码基因；较佳地，所述的3C蛋白酶编码基因位于权利要求3所述的多核苷酸的3’端。
8.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求5～7任一所述的载体，或基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。
9.如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞为能被杆状病毒感染且表达外源蛋白的细胞。
10.一种生产权利要求1～3任一所述的人源N-甲基-D-天冬氨酸受体的突变体的方法，其特征在于，包括步骤：
(1)培养权利要求8或9所述的宿主细胞，获得培养物；和
(2)从培养物中分...
【专利技术属性】
技术研发人员：竺淑佳，谢春，张金宝，宋楠，崔恒祥，邓波，陈向军，
申请(专利权)人：中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心，复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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