一种DSE干菌剂及其在促进植物生长中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种DSE干菌剂及其在促进植物生长中的应用。DSE干菌剂的制备方法包括如下步骤：采用液体培养基培养针A2‑7(25‑28℃、150‑200r/min振荡培养6天)，得到菌液；收集所述菌液中的固体；20‑45℃干燥，得到DSE干菌剂。将DSE干菌剂接种于土壤，之后种植雅典娜紫花苜蓿种子，正常培养。结果表明，本发明专利技术提供的DSE干菌剂可以显著促进雅典娜紫花苜蓿鲜重增加，即促进雅典娜紫花苜蓿的生长。因此，本发明专利技术提供的DSE干菌剂不仅促进植物生长的效果良好，而且易于保存和运输，同时制备时间短(仅需6天)、成本低。本发明专利技术对于植物种植具有重大的应用推广价值，便与进行异地规模化应用。

A DSE dry agent and its application in promoting plant growth

【技术实现步骤摘要】
一种DSE干菌剂及其在促进植物生长中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种DSE干菌剂及其在促进植物生长中的应用。
技术介绍
深色有隔内生真菌(DarkSeptateEndophytes，DSE)是一类可以与绝大多数植物根系形成互利共生关系的土壤真菌，其菌丝颜色较深，具有明显横隔。已有研究表明，DSE具有促进宿主植物吸收矿质营养、促进宿主植物对有机养分的吸收、提高宿主植物抗逆性和提高宿主抗病能力的生态功能，其在植物-微生物-土壤三位一体的生态系统中发挥着重作用。目前，DSE菌剂主要通过将DSE菌块(固体培养获得)或DSE菌液(液体培养获得)接种至植物根部的方式实现。但DSE菌块和DSE菌液均不易于储存，也不适宜大批量运输。因此，DSE菌块和DSE菌液仅仅适用于实验室培养或小批量、就近施用，对于异地规模化应用则很不现实。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可以促进植物生长且易于保存和/或运输的菌剂。本专利技术首先保护一种DSE干菌剂，其制备方法可包括如下步骤：(1)采用液体培养基培养针A2-7，得到菌液；培养的条件可为25-28℃(如25-26℃、26-27℃、27-28℃、25℃、26℃、27℃或28℃)、150-200r/min(如150-180r/min、180-200r/min、150r/min、180r/min或200r/min)振荡培养6天；(2)收集所述菌液中的固体；(3)干燥，得到DSE干菌剂。所述步骤(1)中，针A2-7可以菌片或菌饼的形式加入。所述菌片或菌饼是将针A2-7接种在固体培养基(如PDA固体培养基)上，25-28℃(如25-26、26-27℃、27-28℃、25℃、26℃、27℃或28℃)培养7-10天(如7-8天、8-9天、9-10天、7天、8天、9天或10天)，然后在菌落边缘打孔获得的。所述菌片或菌饼的直径可为4-6mm(如4-5mm、5-6mm、4mm、5mm或6mm)。所述步骤(1)中，菌片或菌饼与液体培养基的比例可为1个菌片或菌饼：(100-200mL)液体培养基，如“1个菌片或菌饼：(100-150mL)液体培养基”、“1个菌片或菌饼：(150-200mL)液体培养基”、“1个菌片或菌饼：100mL液体培养基”、“1个菌片或菌饼：150mL液体培养基”或“1个菌片或菌饼：200mL液体培养基”。上述任一所述液体培养基可为液体MMN培养基。所述液体MMN培养基的制备方法可如下：将CaCl20.05g、MgSO40.15g、NaCl0.025g、FeCl30.01g、KH2PO40.5g、VitaminB1(硫胺素)0.0001g、(NH4)2HPO40.25g、葡萄糖10g、柠檬酸0.2g和Maltextract(麦芽提取物)10g混合，得到混合物，然后加入蒸馏水并定容至1L，分装，121℃高压灭菌30min。所述步骤(2)中，收集菌液中的固体采用过滤或离心实现。所述过滤使用定性滤纸。所述定性滤纸可为中速定性滤纸，即孔径可为30～50微米(如30～40微米、40～50微米、30微米、40微米或50微米)的定性滤纸。所述步骤(3)中，干燥的温度为20-45℃(如20-25℃、25-30℃、30-35℃、35-40℃、40-45℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃或45℃)。从节约角度来讲，干燥温度为20-25℃(如20-23℃、23-25℃、20℃、23℃或25℃)时，成本最低。所述步骤(3)中，干燥可为自然风干或鼓风干燥。所述DSE干菌剂的制备方法中，进行步骤(2)前和/或进行步骤(3)前，可加入载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物。所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种。所述植物材料可为麸皮、豆粕、玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种。所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水。所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述组合物的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。所述DSE干菌剂的制备方法中，进行步骤(2)前和/或进行步骤(3)前，根据需要，还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。上述任一所述DSE干菌剂的含水量可为1-5％(如1-2％、2-5％、1％、2％或5％)。上述任一所述DSE干菌剂的用途可为促进植物生长。上述任一所述DSE干菌剂易于保存和/或运输。本专利技术还保护上述任一所述DSE干菌剂在促进植物生长中的应用。本专利技术还保护一种促进植物生长的方法，可通过向植物施加上述任一所述DSE干菌剂实现。上述方法中，所述“向植物施加DSE干菌剂”可为向植物根系施加DSE干菌剂。上述方法中，所述“向植物施加DSE干菌剂”可为先接种上述任一所述DSE干菌剂，再播种植物种子。上述任一所述针A2-7的全称为深色有隔内生真菌(Darksideasp.)针A2-7，已于2019年11月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18811。上述任一所述促进植物生长具体体现为促进植物鲜重增加。上述任一所述植物可为a1)-a5)中的至少一种：a1)蝶形花亚科植物；a2)苜蓿属植物；a3)苜蓿；a4)紫花苜蓿；a5)雅典娜紫花苜蓿。当植物为雅典娜紫花苜蓿时，DSE干菌剂的施加剂量具体可为每10粒雅典娜紫花苜蓿种子施加0.06gDSE干菌剂。将本专利技术提供的DSE干菌剂(如针A2-7干菌剂c、针A2-7干菌剂2、针A2-7干菌剂d、针A2-7干菌剂e、针A2-7干菌剂f和针A2-7干菌剂g)接种于土壤，之后种植雅典娜紫花苜蓿种子，正常培养。结果表明，本专利技术提供的DSE干菌剂可以显著促进雅典娜紫花苜蓿鲜重增加，即促进雅典娜紫花苜蓿的生长。因此，本专利技术提供的DSE干菌剂不仅促进植物生长的效果良好，而且易于保存和运输，同时制备时间短(仅需6天)、成本低。本专利技术对于植物种植具有重大的应用推广价值，便与进行异地规模化应用。附图说明图1为针A2-7的在根系内的形态照片。图2为针A2-8的在根系内的形态照片。图3为接种针A2-7干菌剂1的紫花苜蓿根内菌丝和微菌核的形态。生物材料保藏说明生物材料的分类命名：Darksideasp.生物材料的菌株编号：针A2-7生物材料的保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心生物材料的保藏单位简称：CGMCC生物材料的保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101生物材料的保藏日期本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DSE干菌剂，其制备方法包括如下步骤：/n(1)采用液体培养基培养深色有隔内生真菌(Darksidea sp.)针A2-7，得到菌液；深色有隔内生真菌(Darksidea sp.)针A2-7，其保藏编号为CGMCC No.18811；所述培养的条件为25-28℃、150-200r/min振荡培养6天；/n(2)收集所述菌液中的固体；/n(3)干燥，得到DSE干菌剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种DSE干菌剂，其制备方法包括如下步骤：
(1)采用液体培养基培养深色有隔内生真菌(Darksideasp.)针A2-7，得到菌液；深色有隔内生真菌(Darksideasp.)针A2-7，其保藏编号为CGMCCNo.18811；所述培养的条件为25-28℃、150-200r/min振荡培养6天；
(2)收集所述菌液中的固体；
(3)干燥，得到DSE干菌剂。


2.如权利要求1所述DSE干菌剂，其特征在于：所述步骤(1)中，液体培养基为液体MMN培养基。


3.如权利要求1所述DSE干菌剂，其特征在于：所述步骤(2)中，收集菌液中的固体采用过滤或离心实现。


4.如权利要求1所述DSE干菌剂，其特征在于：所述步骤(3)中，干燥的温度为20-45℃。


5.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕银丽，王淑惠，全文智，
申请(专利权)人：中国矿业大学北京，北京合生元生态环境工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11