【技术实现步骤摘要】
亚甲基蓝半抗原及亚甲基蓝免疫原的制备方法
本专利技术属于抗原制备
，具体涉及亚甲基蓝半抗原及亚甲基蓝免疫原的制备方法。
技术介绍
亚甲基蓝(化学式为C16H18ClN3S，分子量：319.86)是一种吩噻嗪盐，外观为深绿色青铜光泽结晶(三水合物)，可溶于水/乙醇，不溶于醚类，在空气中较稳定，水溶液呈碱性，有毒。亚甲基蓝广泛应用于化学指示剂、染料、生物染色剂和药物等方面，在细菌性痢疾、癌症、细菌和病毒感染以及中枢神经疾病中均有一定的治疗效果，也被用于水产养殖中，用于治疗某些鱼病或者作为消毒剂使用。然而，亚甲基蓝具有一定的毒性，高浓度亚甲基蓝会使动物中毒并导致死亡。美国食品监督管理局(FDA)、欧盟和日本也均对亚甲基蓝在水产品中残留制定了严格的检测标准。针对亚甲基蓝残留检测，其中一种有效的方式为免疫学检测方法，免疫学检测方法是基于特异性抗体，而产生抗体则需要制备亚甲基蓝免疫原。亚甲基蓝免疫原的制备通常要实施合成亚甲基蓝免疫原过程，在合成环亚甲基蓝免疫原过程中，可以直接采用亚甲基蓝代谢物天青A或天青C作为半抗...
【技术保护点】
1.一种亚甲基蓝半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/nA、中间体1制备/n低温条件下，将反应原料N,N-二甲基对苯二胺、水合硫酸铝、硫代硫酸钠、氯化锌按照摩尔比为1:2:1:1的比例添加至水中并搅拌，滴加重铬酸钾溶液，继续搅拌反应一定时间；然后升至室温，产物经后处理后得到所述中间体1；/nB、中间体2制备/n向反应容器中依次加入体积比为8～12:10～15:13～17的50～100mmol/L N-甲基苯胺、80～120mmol/L2,6二甲基吡啶、80～120mmol/L 5-溴戊酸乙酯溶液，乙腈中回流反应；去除溶剂后，经萃取、水洗、干燥得到油状物；/n向所述油...
【技术特征摘要】
1.一种亚甲基蓝半抗原的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、中间体1制备
低温条件下，将反应原料N,N-二甲基对苯二胺、水合硫酸铝、硫代硫酸钠、氯化锌按照摩尔比为1:2:1:1的比例添加至水中并搅拌，滴加重铬酸钾溶液，继续搅拌反应一定时间；然后升至室温，产物经后处理后得到所述中间体1；
B、中间体2制备
向反应容器中依次加入体积比为8～12:10～15:13～17的50～100mmol/LN-甲基苯胺、80～120mmol/L2,6二甲基吡啶、80～120mmol/L5-溴戊酸乙酯溶液，乙腈中回流反应；去除溶剂后，经萃取、水洗、干燥得到油状物；
向所述油状物中加入NaOH溶液并回流反应，酸调pH后，有机溶剂萃取并分离提纯得到所述中间体2；
C、亚甲基蓝半抗原制备
将所述中间体1和中间体2按摩尔比为1:1的比例溶于甲醇-水溶液中，气体保护下搅拌升温，而后加入摩尔数为中间体11～3倍的碳酸银，回流反应并分离提纯后得到所述亚甲基蓝半抗原。
2.根据权利要求1所述的亚甲基蓝半抗原的制备方法，其特征在于：
其中，步骤A中，所述反应原料与水的摩尔比为1:3～4，原料加入后，水与所述反应原料在0℃条件下搅拌5～10min；
所述重铬酸钾溶液的浓度为0.5～1.0mol/L，滴加完毕后，0℃条件下搅拌反应2h。
3.根据权利要求1所述的亚甲基蓝半抗原的制备方法，其特征在于：
其中，步骤A中，产物依次经抽滤、水洗、丙酮淋洗、油泵拉干后甲基叔丁基醚打浆、再次油泵拉干后得到所述中间体1。
4.根据权利要求1所述的亚甲基蓝半抗原的制备方法，其特征在于：
其中，步骤B中，乙腈中回流反应30h后，减压蒸馏去除溶剂，再依次经乙酸乙酯萃取、水洗两次、无水硫酸钠干燥、60℃旋干得到所述油状物。
5.根据权利要求1所述的亚甲基蓝半抗原的制...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄宣运，杨光昕，沈晓盛，黄冬梅，史永富，王媛，蔡友琼，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
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