艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用，该艾塞那肽注射液的用量为10 ug/kg/d~200 mg/kg/d，用药时间为7~28 d。本发明专利技术艾塞那肽能够改善IUA小鼠宫腔粘连程度，减少胶原纤维沉积，并能促进腺体的恢复；另外，通过下调与粘连相关及炎症相关基因（TGF‑β1、α‑SMA及MMP‑9）的表达水平，从而抑制IUA小鼠体内粘连因子及炎症因子的表达，显著改善IUA小鼠宫腔粘连程度，促进内膜修复和腺体再生的功能，有望用于治疗和预防宫腔粘连。

Application of exenatide injection in the treatment and prevention of intrauterine adhesions

【技术实现步骤摘要】
艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用。
技术介绍
宫腔粘连也称Asherman综合征(AS)。1894年，Fritisch进行了首次描述。1950年Asherman总结29个宫腔粘连病例，对宫腔粘连的频率、病因和症状进一步作出详细的报道。宫腔粘连常发生在创伤、感染后，尤以产损伤后雌二醇水平低为甚。其实质是子宫内膜基底层受损后引起的子宫内膜纤维化疾病。宫腔粘连的主要并发症为不孕、月经不规律(月经过少或闭经)、周期性盆腔痛、妊娠失败、此外，宫腔粘连可能会阻止胚泡植入，损害子宫和早期胎儿的血液供应，从而导致Asherman综合征患者的不孕或反复流产。据2018年的一项报道表明，宫腔粘连的患病率为4.6%，其中月经过少占46.3%，继发性不孕症占70.7%；人工流产史、刮宫史、产后出血史分别占56.1%、51.2%和31.7%；根据分类，轻度宫腔粘连的患病率为34.1%，中度为41.5%，重度为24.4%。宫腔粘连的发生、发展、预后是一个复杂而多变的过程，并不是由单一因素控制，而是由多基因多因素的综合参与，其中纤维化的形成和炎症的产生发展是宫腔粘连的主要病理因素。TGF-β（转化生长因子-β）是重要的促纤维化因子之一，不仅在肝脏纤维化、肺脏纤维化、心脏纤维化等器官组织纤维化中发挥着重要作用，许多实验证实TGF-β通过调节下游基因的表达，也参与宫腔粘连的形成。另外有研究发现，在肺纤维化动物模型以及人类特发性肺纤维化中,纤维化肺组织局部不仅TGF-β1水平升高,而且还聚集了大量表达平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)的肌成纤维细胞。炎症细胞分泌高水平的TGF-β1，TGF-β1一方面抑制成纤维细胞的增殖,使其停留在细胞间期的某一时相,加速α-SMAmRNA和蛋白的合成,进而分化成肌成纤维细胞；另一方面又抑制肌成纤维细胞的凋亡。成纤维细胞产生胶原蛋白、金属蛋白酶（MMP）及其组织抑制剂（TIMP），其中促炎因子MMP-9（基质金属蛋白酶9）的缺乏可改善伤口愈合，皮肤伤口的特征是MMP-9过度增加和TIMP1活性降低，即MMP-9/TIMP-1比值异常升高。有研究发现，体外用exendin-4预处理的大鼠的成纤维细胞/成肌纤维细胞集落来源的培养基中，MMP-9/TIMP-1比值显着降低（P<0.001）。艾塞那肽(exenatide)为胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物exendin-4的人工合成品，由39个氨基酸组成。其主要用于改善2型糖尿病患者的血糖控制，适用于单用二甲双胍、磺酰脲类．以及二甲双胍合用磺酰脲类，血糖仍控制不佳的患者。同时，艾塞那肽除了在代谢疾病中有作用外，大量实验证明艾塞那肽在抗纤维化方面也有很好的疗效，但目前尚未发现艾塞那肽在治疗宫腔粘连方面的研究。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用。为解决上述问题，本专利技术所述的艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用，其特征在于：该艾塞那肽注射液的用量为10ug/kg/d~200mg/kg/d，用药时间为7~28d。所述艾塞那肽注射液的用量为50ug/kg/d，用药时间为14d。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：本专利技术通过机械损伤加脂多糖（LPS）炎症双重作用刺激建立宫腔粘连小鼠模型。并按照分组给予不用剂量艾塞那肽进行干预。研究发现：艾塞那肽能够改善IUA小鼠宫腔粘连程度，减少胶原纤维沉积（P＜0.05），并能促进腺体的恢复；另外，通过下调与粘连相关及炎症相关基因（TGF-β1、α-SMA及MMP-9）的表达水平，从而抑制IUA小鼠体内粘连因子及炎症因子的表达，显著改善IUA小鼠宫腔粘连程度，促进内膜修复和腺体再生的功能，有望用于治疗和预防宫腔粘连。下述所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。⑴实验动物的购买与饲养：本动物实验严格遵守兰州大学动物实验中心操作规范。54只C57BL/6雌性小鼠，8W大小，16~18g/只，购于北京维通利华实验动物中心，饲养于兰州大学医学院动物实验室，温度控制在22±2℃内，湿度为70%，光周期为12h的环境下饲养，整个实验过程小鼠自由饮食、饮水。⑵实验所需试剂及仪器，如表1、表2：表1实验所需试剂表2实验所需仪器相关溶液的配制：ⅰ6mg/L脂多糖溶液的配制：称取0.6mg脂多糖，溶于10mL的生理盐水中，即配成浓度为60mg/L的脂多糖溶液，取出2mL60mg/L的脂多糖溶液稀释10倍，即配成该实验所需6mg/L的脂多糖溶液。ⅱ艾塞那肽溶液的配制：艾塞那肽50ug/kg高剂量组小鼠6只，每只按照30g计算给药量，给药剂量为20ug/kg，总计每日给药量为：0.03kg×50ug/kg×6=9mg；艾塞那肽10ug/kg中剂量组小鼠6只，每只按照30g计算给药量，给药剂量为10ug/kg，总计每日给药量为：0.03kg×10ug/kg×6=1.8mg；艾塞那肽2ug/kg低剂量组小鼠6只，每只按照30g计算给药量，给药剂量为5ug/kg，总计每日给药量为：0.03kg×2ug/kg×6=0.36mg；因此，高中低剂量3组小鼠每日给药总量为：9mg+1.8mg+0.36mg=11.16mg。有研究证实，兔IUA建模型后7天，见子宫内膜表面完全由上皮细胞排列，再生细胞扁平化（60%~70%）、立方形或低柱状。可见少数腺体，基质突出显示更多纤维组织，胶原蛋白聚集，局灶性出血、充血、白细胞浸润，可见一些新生的毛细血管。14天内子宫基质显示有少量多形核白细胞和含铁血黄素的巨噬细胞浸润，表现出间质纤维化和胶原蛋白聚集；28天后子宫内膜的组织学重建在基本完成，可在少数间质区域观察到纤维化【YANGW,LAIX,WEIMIND,etal.exenatideRestoresEndothelium-DependentRelaxationinRatAortaRingsImpairedbyHighGlucose:ANovelInsightintothePPARβ-NOSignalingPathway[J].PlosOne,2015,10(5):e0126249】。因此，本实验将小鼠的给药周期定为14天，每日给药1次，总共给药14次，因此整个给药过程中总药量为：11.16mg×14=156.24mg，为了避免药物配制过程中的损耗，因此称取药物160mg。将称取的160mg药物溶解于二甲基亚砜（DMSO）中（原则上DMSO的量不超过药物总体积的1%），待药物完全溶解于DMSO中，再用灭菌后的ddH2O将溶解后的药物按照实验所需，稀释成三种给药浓度，最后将各浓度药物分装到已灭菌好的EP管中，封口、打标，并置于-20℃保存备用。⑶动物分组及给药方案：36只19周大的C57BL/6雌性小鼠分组如表3：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用，其特征在于：该艾塞那肽注射液的用量为10 ug/kg/d~200 mg/kg/d，用药时间为7~28 d。/n

【技术特征摘要】
1.艾塞那肽注射液在治疗和预防宫腔粘连药物中的应用，其特征在于：该艾塞那肽注射液的用量为10ug/kg/d~200mg/kg/d，用药时间为7~28d。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王一青，
申请(专利权)人：兰州大学第一医院，
类型：发明
国别省市：甘肃;62