心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用。心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用，其中，所述炎症性肠病包括溃疡性结肠炎、克罗恩病、未定型结肠炎；有益效果是：对正常细胞无不利影响，且无毒副作用，其能够有效缓解结肠炎的结肠炎症，减少结肠组织炎性细胞因子的分泌。

Application of atrial natriuretic peptide in the preparation of therapeutic drugs for inflammatory bowel disease

【技术实现步骤摘要】
心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用
本专利技术属于生物医学领域，尤其心房利钠肽在制备消炎药物中的应用。
技术介绍
炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)主要包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)和克罗恩病(crohn’sdisease,CD)，它治疗的突破离不开新药的开发。IBD主要治疗药物包括5氨基水杨酸，糖皮质激素，免疫抑制剂和生物制剂，通过免疫调节诱导和维持疾病缓解。近年来药物研发主要集中在生物制剂和小分子靶向药物，但对激素类药物的研究相对缺乏。虽然糖皮质激素能迅速诱导缓解且价格低廉，但由于同时调控生长、发育、代谢等生理功能，长期使用副作用较多，易引起消化道出血、骨质疏松、代谢紊乱等，无法用于IBD维持治疗。然而激素类药物显示的强大抗炎作用提示我们可以从内分泌-免疫调控角度寻找新的突破口，开发有效且廉价的药物。如CN108815199A中公开的鼠衣原体在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用。心房钠尿肽(ANP)又称心钠素，是最初由心房肌细胞中提取的一种肽类激素。目前对于ANP的研究领域也较为广泛，ANP具有利尿、利钠、舒张血管平滑肌的生理功能，可调控水盐平衡和维持血压。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用，主要解决了现有技术中心房利钠肽在消炎药物尤其是炎症性肠病治疗药物的应用空白。为了解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：心房利钠肽在制备消炎药物中的应用。心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用。一种方式，其中，所述心房利钠肽氨基酸序列为：Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr。一种方式，所述心房利钠肽化学分子式为C127H205N45O39S3。一种方式，所述炎症性肠病包括溃疡性结肠炎、克罗恩病。一种方式，所述炎症性肠病包括未定型结肠炎。本专利技术的有益效果是：对正常细胞无不利影响，且无毒副作用，其能够有效缓解结肠炎的结肠炎症，减少结肠组织炎性细胞因子的分泌。附图说明图1为ANP及其受体在小鼠肠道及相关淋巴器官的表达情况图表；图2为ANP缓解小鼠肠道炎症情况图表；图3为ANP减少小鼠肠道炎性因子和自噬相关基因的表达图表。具体实施方式实施例1对鼠类溃疡性结肠炎治疗作用材料：A.小鼠：C57BL/6J品种小鼠(购于北京维通利华公司)，SPF环境下饲养到20-22g，8周龄左右。B.人心房利钠肽ANP(购于英国TocrisBioscience公司)，氨基酸序列Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-Phe-Arg-Tyr，分子量为3080.46Da；纯度为95.8％。方法与结果：一、构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型及ANP重组蛋白的干预。①实验小鼠的分组：实验小鼠的分组：雄性C57BL/6小鼠24只，随机分为对照组、DSS组、DSS+2ugANP组和DSS+20ugANP组，6只/组，小鼠适应性饲养7天，观察其饮食、活动、大小便情况并称量体重。②小鼠的干预：对照组：自由饮用正常水7天，于第0、1、3、5、7天腹腔注射400ulPBS溶液；DSS组：小鼠自由饮用2.5％DSS溶液7天，于第0、1、3、5、7天腹腔注射200ulPBS溶液；ANP干预组：小鼠自由饮用2.5％DSS溶液7天，于第0、1、3、5、7天腹腔注射200ul含2ug和20ug重组ANP的PBS溶液。③小鼠一般情况的记录：造模开始后，每天记录小鼠的体重、大便的性状(正常、糊状便还是稀水样便)及带血情况(无、隐血还是明显肉眼血便)和活动情况(活跃还是倦怠)等。④小鼠处死及标本的收集：于第7天处死小鼠，戊巴比妥钠腹腔麻醉小鼠后进行眼球取血，沿腹中线打开腹腔，自直肠以上到回盲部留取完整直结肠，测定并记录结肠长度；同时留取脾脏并称重。清洗结肠粪便，取远端结肠组织于-80℃保存，用于RT-qPCR检测。二、实时定量RT-qPCR①总RNA的提取及浓度测定剪取组织约10mg置于2mlEP管中，编号，加入1mlTrizol溶液和2颗磁珠；放入研磨仪上匀浆，65Hz、120sec、2次；加入氯仿200ul(1/5体积的trizol溶液)于匀浆裂解液中，盖紧管盖，剧烈摇晃15sec，待溶液充分混匀至无分相现象后，室温下放置5min；离心：4℃、12000rpm、15min；小心地从离心机中取出EP管，匀浆液分为三层：无色的上清液、中间白色层、带颜色的下层有机相；取另一新1.5mlEP管并编号，吸取上清液300ul转移至新EP管中，向上清液中加入300ul等体积的异丙醇，轻轻地上下颠倒EP管使其充分混匀，室温下放置10min，离心：4℃、12000rpm、10min；从离心机中取出EP管，可见试管底部有RNA沉淀，小心弃去上清液，避免丢弃RNA沉淀；缓慢地沿管壁加入1ml预冷的75％乙醇(注意勿触及沉淀)，轻轻地上下颠倒离心管，离心：4℃、12000rpm、5min；小心弃去上清，于滤纸上倒置EP管，室温干燥沉淀5min左右，干燥沉淀后，加入适量的高压双蒸水，充分溶解沉淀，加入的水量根据沉淀的多少进行调整；待RNA沉淀完全溶解，离心机瞬离。②RNA浓度测定洗净比色杯，打开分光光度仪，比色杯中加入双蒸水调零。加2ul待测样本和98ul双蒸水于比色杯中，测定并记录A260和A280数值，以计算RNA的纯度及浓度。③逆转录取出逆转录所需的试剂，在室温下解冻，涡旋振荡混匀后瞬离；配制反应体系：根据下列逆转录反应体系比例，计算适量体积所需的各成分的用量，分别加入0.5mlEP管，涡旋仪振荡混匀后瞬离；逆转录：配好逆转录反应体系后，在逆转录仪器中逆转录，37℃、15min，85℃、15sec。之后进行PCR或于-20℃中储存。10ul反应体系：RNA-PrimerMix(5X)2ul+RNA待测样品(1/浓度*1000)ul+DEPC水(10-2-VRNA)(ul)。④RT-qPCR取出PCR所需的试剂，在室温下解冻，涡旋振荡混匀后瞬离；配制反应体系：根据待测样本和待测指标的数量，按照下列PCR反应体系比例，配制实际所需的用量；涡旋仪振荡混匀后瞬离；加样：取96孔PCR板，设计加样的顺序并做好记号，先在一侧壁上加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.心房利钠肽在制备炎症性肠病治疗药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述心房利钠肽氨基酸序列为：Ser-Leu-Arg-Arg-Ser-Ser-Cys-Phe-Gly-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile-Gly-Ala-Gln-Ser-Gly-Leu-Gly-Cys-Asn-Ser-...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈超越，付妤，全润泽，张颖，赵溪，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42