一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法，包括以下步骤：A.前处理；B.将待检测的样品溶液经高效液相色谱‑四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪检测，得到待检测样品溶液的高效液相色谱图；C数据分析。本发明专利技术公开的一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法具有以下有益效果：1、类胡萝卜素测定低限为0.05mg/kg，标准曲线在10ng/mL～200ng/mL线性范围内良好；2、前处理结合了固相萃取和基体分散净化技术，通过一次前处理，实现了理化性质差异很大的3大类类胡萝卜素的提取、净化工作，在提高检测效率的同时降低了昂贵的时间、试剂成本消耗；3、本方法应用于水产品，共检测到类胡萝卜素种类50种。

A high throughput method for the determination of carotenoids in aquatic products

【技术实现步骤摘要】
一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法
本专利技术涉及水产品营养成分检测领域，尤其涉及一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法。
技术介绍
类胡萝卜素，是一类天然色素分子，主要存在于鱼、虾、蟹、贝壳等水产生物体中，其结构组成与分布是评价水产品品质的重要指标。这些光敏性的类胡萝卜素除了作为机体、组织的着色剂，提高感官品质外，还能增强水产生物对环境的适应能力和一些重要的生理功能，包括提高育苗效率，抗病力等。研究表明：水产生物不能从头合成类胡萝卜素，但是可将膳食类胡萝卜素进行转化或直接吸收，每种生物都有自己独有的类胡萝卜素，甚至不同组织之间都有其特殊性，这也是水产品中类胡萝卜素种类较多的原因之一。类胡萝卜素种类众多，按照化学结构划分为三大类：第一类是游离胡萝卜素，它们的分子中没有氧，是一类高度不饱和的碳氢化合物，多呈现橘红色，比如α,β-胡萝卜素等；第二类是含氧胡萝卜素，它们是胡萝卜素的氧化衍生物，在分子两头的环中含有一个或多个氧分子，最常见的修饰基团有羟基、甲氧基、羰基、羧基等，比如叶黄素、虾青素等，前两类统称为非酯化类胡萝卜素；第三类是胡萝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/nA.前处理：/n(A1)称取1g待检测水产品，加入10mL含0.1wt％2,6-二叔丁基对甲酚的甲醇溶液中，震荡5min，超声提取20min，再以12000r/min的转速在4～10摄氏度下离心5～10min，完成后得到得到有机相及残渣；/n(A2)取步骤(A1)得到的有机相，并向其中加入至少4倍体积的水得到上样液，然后将上样液经HLB柱净化得到净化后的上样液，然后通过氮吹将净化后的上样液浓缩至<2.0ml，然后通过含0.1wt％HF的甲醇溶液定容至2.0ml，得到定容后的净化上样液，其中：/nHLB柱净化采用含0...

【技术特征摘要】
1.一种水产品中类胡萝卜素的高通量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.前处理：
(A1)称取1g待检测水产品，加入10mL含0.1wt％2,6-二叔丁基对甲酚的甲醇溶液中，震荡5min，超声提取20min，再以12000r/min的转速在4～10摄氏度下离心5～10min，完成后得到得到有机相及残渣；
(A2)取步骤(A1)得到的有机相，并向其中加入至少4倍体积的水得到上样液，然后将上样液经HLB柱净化得到净化后的上样液，然后通过氮吹将净化后的上样液浓缩至<2.0ml，然后通过含0.1wt％HF的甲醇溶液定容至2.0ml，得到定容后的净化上样液，其中：
HLB柱净化采用含0.1wt％2,6-二叔丁基对甲酚的甲醇溶液作为洗脱液进行洗脱；
(A3)将步骤(A1)的剩余残渣加入10mL含0.1wt％2,6-二叔丁基对甲酚的甲醇-二氯甲烷溶液中，震荡5min，超声提取20min，以12000r/min的转速在4～10摄氏度下离心5～10min，
完成后得到有机相及残渣，其中：
甲醇-二氯甲烷溶液中，甲醇与二氯甲烷的体积比为1:1；
(A4)取步骤(A3)得到的有机相，氮吹浓缩至体积不在变化，然后通过含0.1wt％HF的甲醇溶液定容至2.0ml，再向其中加入1g中性氧化铝粉充分震荡，以12000r/min的转速在4～10摄氏度下离心5～10min，完成后得到上清液及沉淀；
(A5)合并步骤(A2)得到的定容后的净化上样液和步骤(A4)得到的上清液，然后过孔径为0.22μm的滤膜得到待检测的样品溶液；
B.将步骤(A5)得到的待检测的样品溶液经高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪检测，得到待检测样品溶液的高效液相色谱图，其中，仪器条件如下：
高效液相参数：
色谱柱ZORBAXEclipseXDBC8柱2.1mmx100mm,粒径3.5μm；
流动相A：含有0.1％甲酸+2mM甲酸铵的水溶液；
流动相B：含有0.1v/v％甲酸+15v/v％异丙醇的甲醇溶液，流速:0.8mL/min，进样量:5.0μL，分流比1:4进样，梯度见下表:
正、负离子模式梯度洗脱程序






质谱参数：质谱在正/负离子转换模式下进行全扫描测定，质量范围：m/z200～1500，分辨率70000，自动增益控制目标值5*e5；负离子模式2900V，正离子模式3800V，离子传输管温度为350℃，去溶剂气氮气流速：35L/h，辅助气氮气流速：15L/h，气化室温度400℃；在样品运行前对仪器分别进行正负离子校正；二级采用自动触发模式，分辨率35,000，自动增益控制目标值2*e5，碰撞能量范围10-80％，保留时间根据目标物保留时间±1.0min；C数据分析
C1绘制标准品...

【专利技术属性】
技术研发人员：李双，陈娟娟，徐继林，陈海敏，杨锐，骆其君，吴玮，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33