用于体外活细胞的耐药性检测的方法及培养液技术

本发明专利技术涉及细胞耐药性快速检测领域，公开了一种用于活体细胞的耐药性快速灵敏精准的检测方法，包括以下具体步骤：在对待检测的活体细胞进行检测前先对所述待检测的活体细胞进行孵育，于孵育后的不同时间点连续检测标志物的浓度实现上述检测；在孵育前加入能够被所述待检测的活体细胞利用的检测试剂混合物以及进行耐药性检测的待测化合物；所述孵育是指将待检测的活体细胞加入确定浓度的培养液培养。本发明专利技术的优点在于，能够快速灵敏地对活体细胞的生长进行检测，包括其细胞耐药性的检测，发现目前方法不能检测到的“隐藏”耐药性,预防超级细菌和耐药肿瘤,开发高效新药等方面具有较高的应用价值。

Method and culture medium for drug resistance test of cells in vitro

【技术实现步骤摘要】
用于体外活细胞的耐药性检测的方法及培养液
本专利技术涉及细胞耐药性快速高灵敏性检测领域，特别涉及一种细胞部分耐药性的检测方法及相应的检测化合物。
技术介绍
大量超级细菌和肿瘤耐药性的出现,是目前急待解决的共公卫生问题.除了新药,一种能早期发现耐药性的方法也许能从源头上解决超级细菌和肿瘤耐药性的出现。目前实验室常用检测方法主要分三大部分，即细菌学、免疫学、分子生物学。我国目前临床微生物现代药敏实验，存在些许问题，比如，检测时间久，结果不够精确，影响诊断结果，且某些鉴定设备价格昂贵，一些中小医院无力使用。目前细菌药敏检测方法主要有定性测定的纸片扩散法(K-B法)，定量测定的稀释法，E法和全自动药敏仪法，一般都需要1天时间，才能出结果。目前，实验室以及临床上有多种方法可以用来检测结核菌，最常用的主要有痰涂片镜检法、罗氏固体培养法、BACTECMGIT960系统培养法、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)等等。现有的结核分枝杆菌药敏检测方法存在着以下问题：痰涂片对于制片要求高，镜检需要依靠人力完成，这大大加大了临床实验人员本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：在对待检测的活体细胞进行检测前先对所述待检测的活体细胞进行孵育，于孵育后检测标志物的浓度实现上述检测；在孵育前加入能够被所述待检测的活体细胞利用的检测试剂混合物以及进行耐药性检测的待测化合物；所述孵育是指将待检测的活体细胞加入确定浓度的培养液培养；耐药性是指待测化合物不能完全抑制待检测的活体细胞的生长。/n

【技术特征摘要】
20180628 CN 20181069137891.一种用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，包括以下具体步骤：在对待检测的活体细胞进行检测前先对所述待检测的活体细胞进行孵育，于孵育后检测标志物的浓度实现上述检测；在孵育前加入能够被所述待检测的活体细胞利用的检测试剂混合物以及进行耐药性检测的待测化合物；所述孵育是指将待检测的活体细胞加入确定浓度的培养液培养；耐药性是指待测化合物不能完全抑制待检测的活体细胞的生长。


2.根据权利要求1所述的用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，于孵育后检测标志物的浓度的过程中，按照预定的时间间隔连续检测标志物的浓度。


3.根据权利要求1所述的用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，还包括以下步骤：在优化的条件下，检测试剂混合物可以用速率法跟踪给药后细胞的生长，检测细胞耐药性；速率法是指按照预定的时间间隔连续检测标志物的浓度信号随时间的变化；细胞耐药性包括用常规方法不能检测到的耐药性。


4.根据权利要求1所述的用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，还包括浓度调整步骤：在孵育前调整用于孵育的细胞培养液浓度令所述待检测的活体细胞大致达到更优的生长速度。


5.根据权利要求4所述的用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，在浓度调整步骤完成后，对细胞培养液的浓度进行稀释，稀释范围是麦氏0.5稀释2-4000倍；或者在所述体外活细胞为快生长菌的情况下，使用40倍稀释。


6.根据权利要求5所述的用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，检测试剂混合物为EZMTT和电子偶联剂。


7.根据权利要求1所述的用于体外活细胞的耐药性检测的方法，其特征在于，还包括抑制率检测步骤：在孵育所述待检测活体细胞同时，将等量的待检测活体细胞加入相同浓度的培养液中制成阳性对照组，并用相同浓度的培养液不加待检测活体细胞制成阴性对照组；进一步与阳性和阴性对照组孵育后检测标志物的浓度进行比对，得到所述待测化合物对所述待检测活体细胞的抑制率。

【专利技术属性】
技术研发人员：阮奔放，阮健昵福，
申请(专利权)人：安吉汉菁生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33