一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于纳米金‑石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，采用了K

A rapid detection method of myocardial infarction based on nano gold graphene quantum dots

【技术实现步骤摘要】
一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法
本专利技术涉及肌钙蛋白的检测
，具体涉及一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法。
技术介绍
肌钙蛋白是组成横纹肌细肌丝的结构蛋白，其亚单位为肌钙蛋白I(CTnI)、肌钙蛋白T(cTnT)和肌钙蛋白C(cTnC)。心肌钙蛋白I(cTnI)是一个分子量为22.5KD的心肌蛋白，它与肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白C(TnC)一起形成一个心肌钙蛋白复合物，共同完成细胞内肌动蛋白间相互作用的钙信号传递的基本功能。目前，检测肌钙蛋白的方法有：酶联免疫吸附法、化学发光法、酶联荧光分析法、胶体金免疫层析法、免疫比浊法、金标银染法、质谱分析法、生物传感器技术等。其中，酶联免疫吸附法的测定周期长、灵敏度相对较低、线型范围偏窄的问题，从而限制了该方法的进一步应用。化学发光法是将发光分析和免疫反应相结合而建立起来的一种检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术。酶联荧光分析法采用了一步夹心与酶联荧光相结合的方法，操作方便，但是检测范围受限。胶体金免疫层析法仅能用于肌钙蛋白的定性分析。免疫比浊分析法属于液相沉淀实验，其原理是将抗体、抗原在特定的电解质溶液中反应，形成小分子免疫复合物，在增浊剂的作用下，迅速西古城免疫复合物微粒，使反应液出现浊度。金标银染法是预先准备好膜基底和免疫金探针，集合已补发双单克隆抗体加薪技术、蛋白质芯片技术、纳米金探针技术以及纳米颗粒上的银染放大技术对肌钙蛋白进行快速测定的方法，但是目前还处于初步探索阶段，尚不成熟。质谱分析法通过电离源将蛋白质分子转化为气相离子，然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量于电荷壁纸的蛋白质离子分离开来，经过离子检测器收集分离的离子，确定离子的M/Z值，分析鉴定未知蛋白质，这种方法也只能定性分析，不能定量分析，尚需进一步探索研究。生物传感器由生物敏感膜、换能器和电子线路三部分构成，待分析物扩散进入固定化生物敏感膜层，经分子识别，发生生物学反应，产生的信息被环能器转变成可定量处理的电信号，再经电子线路放大并输出，既有广谱的测定能力，但是，目前的检测质量控制手段不完善，有待进一步提高和成熟。因此，亟需探索研究新的肌钙蛋白检测方法来实现对肌钙蛋白的快速、准确的定量检测并且检测质量可控。
技术实现思路
为了克服以上问题，本专利技术旨在提供一种肌钙蛋白检测溶液的制备方法和肌钙蛋白浓度的检测方法，从而实现肌钙蛋白的快速、准备地检测，从而实现基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，包括：步骤A1：制备肌钙蛋白检测溶液：其中，步骤01：将K2CO3加入Au纳米颗粒溶液中混合，得到第一混合溶液；步骤02：向第一混合溶液中加入肌钙蛋白抗体，搅拌均匀，得到第二混合溶液；步骤03：向第二混合溶液中加入第一浓度的牛血清白蛋白溶液，搅拌均匀，得到肌钙蛋白检测溶液；步骤A2：在所述肌钙蛋白检测溶液中加入不同预设浓度肌钙蛋白的血清样品；步骤A3：在完成步骤A2的肌钙蛋白检测溶液中加入石墨烯量子点，得到具有不同预设浓度肌钙蛋白的荧光检测溶液；步骤A4：对含有不同预设浓度的肌钙蛋白的所述荧光检测溶液进行激发，得到不同预设浓度的肌钙蛋白所对应的标准光致发光图谱；步骤A5：根据不同预设浓度的肌钙蛋白所对应的标准光致发光图谱进行拟合得到，肌钙蛋白浓度与荧光强度的关系；步骤A6：将实际待测血清样品加入采用权利要求1的方法制备的肌钙蛋白检测溶液中；步骤A7：在完成步骤A6的检测溶液中加入石墨烯量子点，得到实际荧光检测溶液；步骤A8：对实际荧光检测溶液进行激发，得到实际待测血清样品的光致发光图谱；步骤A9：根据实际待测血清样品的光致发光图谱中的荧光强度，对应所述步骤A5中得到的肌钙蛋白浓度与荧光强度的关系，计算出实际待测血清样品中的肌钙蛋白浓度。在一些实施例中，所述步骤03之后，还包括步骤04：首先，将检测溶液进行洗涤；然后，重悬于第二浓度的牛血清白蛋白溶液中。在一些实施例中，所述步骤04中，将检测溶液进行洗涤的过程包括：采用多次离心，将上清液倒掉的方法；所述步骤04中，所述第二浓度小于所述第一浓度。在一些实施例中，所述第一浓度为牛血清白蛋白溶液中牛血清白蛋白的质量百分比为5～10％；所述第二浓度为牛血清白蛋白溶液中牛血清白蛋白的质量百分比为1～3％。在一些实施例中，所述步骤01中，所述K2CO3与Au纳米颗粒混合后，调节第一混合溶液的PH值大于8；所述K2CO3的摩尔质量与所述Au纳米颗粒的摩尔质量的比为(1～2):1；所述Au纳米颗粒溶液的体积为2～3ml。在一些实施例中，所述步骤02中，所述肌钙蛋白抗体的浓度为10～15mg/ml，所述肌钙蛋白抗体的体积为1～1.5ml；所述步骤03中，所述牛血清白蛋白溶液的体积为800～890μl。在一些实施例中，所述步骤A5中，拟合得到的肌钙蛋白浓度与荧光强度的关系为：Y＝932X+2444，其中，X表示lgC，C为肌钙蛋白浓度；Y表示荧光强度差，Y＝(F-F0)/F0；其中，F加入肌钙蛋白血清样品的荧光强度，F0为没有加入肌钙蛋白血清样品的荧光强度。在一些实施例中，所述步骤A2中，血清样品的体积与所述肌钙蛋白检测溶液的体积比为1:1；所述步骤A2中，还同时对肌钙蛋白检测溶液进行恒温加热。在一些实施例中，所述恒温加热的温度为30～40℃。在一些实施例中，所述步骤A3中，加入的石墨烯量子点的浓度为0.05～0.1mg/ml；所述步骤A3中，还同时对肌钙蛋白检测溶液进行恒温加热。本专利技术提供了一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，包括肌钙蛋白检测溶液的制备方法和肌钙蛋白浓度的检测方法，采用了K2CO3加入Au纳米颗粒溶液中混合，得到第一混合溶液，在第一混合溶液中加入肌钙蛋白抗体，从而使得肌钙蛋白抗体负载于Au纳米颗粒上，并且，加入牛血清白蛋白溶液，来封闭掉肌钙蛋白抗体上的其它活性位点，使得所制备的检测溶液仅能够结合肌钙蛋白抗原，来达到检测肌钙蛋白抗原的目的。此外，在对检测溶液进行洗涤后，重悬于牛血清白蛋白溶液中，来稳定制备得到的检测溶液。本专利技术的制备方法，制备简单，成本低廉，有利于后续对肌钙蛋白的快速检测。此外，在本专利技术的肌钙蛋白检测溶液的制备方法的基础上，对肌钙蛋白检测溶液进行的检测方法，引入了石墨烯量子点，被肌钙蛋白抗体修饰的纳米金与石墨烯量子点的荧光共振能量转移，快速准确的检测出肌钙蛋白的浓度。这里，由于纳米金被肌钙蛋白抗体修饰后，可以在激光辐射下，与石墨烯量子点发生能量共振，激发出荧光，从而使得肌钙蛋白抗原与荧光强度之间产生线性相关关系，快速检测出待测血清样品中肌钙蛋白的浓度。附图说明图1为本专利技术的一个实施例的肌钙蛋白检测溶液的制备方法的流程示意图图2为本专利技术的一个实施例的肌钙蛋白浓度的检测方法的流程示意图<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，其特征在于，包括：/n步骤A1：制备肌钙蛋白检测溶液：其中，/n步骤01：将K

【技术特征摘要】
1.一种基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，其特征在于，包括：
步骤A1：制备肌钙蛋白检测溶液：其中，
步骤01：将K2CO3加入Au纳米颗粒溶液中混合，得到第一混合溶液；
步骤02：向第一混合溶液中加入肌钙蛋白抗体，搅拌均匀，得到第二混合溶液；
步骤03：向第二混合溶液中加入第一浓度的牛血清白蛋白溶液，搅拌均匀，得到肌钙蛋白检测溶液；
步骤A2：在所述肌钙蛋白检测溶液中加入不同预设浓度肌钙蛋白的血清样品；
步骤A3：在完成步骤A2的肌钙蛋白检测溶液中加入石墨烯量子点，得到具有不同预设浓度肌钙蛋白的荧光检测溶液；
步骤A4：对含有不同预设浓度的肌钙蛋白的所述荧光检测溶液进行激发，得到不同预设浓度的肌钙蛋白所对应的标准光致发光图谱；
步骤A5：根据不同预设浓度的肌钙蛋白所对应的标准光致发光图谱进行拟合得到，肌钙蛋白浓度与荧光强度的关系；
步骤A6：将实际待测血清样品加入采用权利要求1的方法制备的肌钙蛋白检测溶液中；
步骤A7：在完成步骤A6的检测溶液中加入石墨烯量子点，得到实际荧光检测溶液；
步骤A8：对实际荧光检测溶液进行激发，得到实际待测血清样品的光致发光图谱；
步骤A9：根据实际待测血清样品的光致发光图谱中的荧光强度，对应所述步骤A5中得到的肌钙蛋白浓度与荧光强度的关系，计算出实际待测血清样品中的肌钙蛋白浓度。


2.根据权利要求1所述的基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，其特征在于，所述步骤03之后，还包括步骤04：首先，将检测溶液进行洗涤；然后，重悬于第二浓度的牛血清白蛋白溶液中。


3.根据权利要求2所述的基于纳米金-石墨烯量子点的心肌梗死的快速检测方法，其特征在于，所述步骤04中，将检测溶液进行洗涤的过程包括：采用多次离心，将上清液倒掉的方法；所述步骤04中，所述第二浓度小于所述第一浓度。


4.根据权利要求3所述的基于纳米金-石墨烯...

【专利技术属性】
技术研发人员：何斌，郭小瑜，薛晓梅，直士博，李慧珺，洪婷，周苗，韦亚忠，
申请(专利权)人：何斌，王现英，
类型：发明
国别省市：上海;31