基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法技术

本发明专利技术属于淡水养殖的技术领域，涉及基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法。本发明专利技术包括以下步骤：(1)提取感染嗜水气单胞菌的日本沼虾的血淋巴，分离血细胞，裂解细胞提取蛋白质；(2)对步骤(2)获得的蛋白质进行胰蛋白酶酶解，对酶解肽段进行iTRAQ标记；(3)对步骤(3)标记的肽段进行纯化、液相色谱分离和质谱分析；(4)对步骤(3)获得的质谱分析结果进行蛋白质鉴定和定量分析及生物信息学分析，分析获得差异表达蛋白质。本发明专利技术基于iTRAQ对受感染日本沼虾的快速蛋白质组学研究，为进一步研究免疫相关蛋白的作用提供参考。

Analysis of differential expression of proteins in blood cells of Macrobrachium nipponense infected by Aeromonas hydrophila based on quantitative proteomics

【技术实现步骤摘要】
基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法
本专利技术属于淡水养殖的
，涉及基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法。
技术介绍
目前，国内外学者对嗜水气单胞菌的生物学特性、流行病学特征、快速鉴定、分型及其蛋白质组学等研究已有了很大进展。针对虾类免疫机制的研究主要集中在海水养殖虾中，对中国对虾、斑节对虾、凡纳滨对虾等海水虾的免疫基因及免疫相关蛋白的研究取得了较丰富的成果。海水虾类的研究结果固然能为淡水虾类的免疫机制研究提供参考，然而淡水养殖虾类同海水养殖虾类毕竟暴露于不同的生长环境，面对的外界刺激不同，具有淡水养殖环境的特异性。现阶段的研究结果极大的丰富了日本沼虾抗感染免疫的基因数据，然而，随着对基因组研究的深入，人们认识到单纯从基因组信息并不能完全揭示生命的奥秘。因为只有蛋白质才是生命活动的功能载体，有功能的蛋白质是基因在转录、翻译甚至是翻译后经过剪接加工产生的，而蛋白质翻译后功能修饰并不是由基因决定。目前对嗜水气单胞菌感染后沼虾血细胞的蛋白质组研究还未见报道本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)提取感染嗜水气单胞菌的日本沼虾的血淋巴，分离血细胞，裂解细胞提取蛋白质；/n(2)对步骤(2)获得的蛋白质进行胰蛋白酶酶解，对酶解肽段进行iTRAQ标记；/n(3)对步骤(3)标记的肽段进行纯化、液相色谱分离和质谱分析；/n(4)对步骤(3)获得的质谱分析结果进行蛋白质鉴定和定量分析及生物信息学分析，分析获得差异表达蛋白质。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取感染嗜水气单胞菌的日本沼虾的血淋巴，分离血细胞，裂解细胞提取蛋白质；
(2)对步骤(2)获得的蛋白质进行胰蛋白酶酶解，对酶解肽段进行iTRAQ标记；
(3)对步骤(3)标记的肽段进行纯化、液相色谱分离和质谱分析；
(4)对步骤(3)获得的质谱分析结果进行蛋白质鉴定和定量分析及生物信息学分析，分析获得差异表达蛋白质。


2.根据权利要求1所述的基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括从感染后的日本沼虾围心腔中抽取血淋巴，与抗凝剂混合，将混合物低温离心，去上清，再加入质量浓度0.85％NaCl溶液洗涤血细胞。


3.根据权利要求1所述的基于蛋白质组学定量技术分析嗜水气单胞菌感染日本沼虾血细胞差异表达蛋白质的方法，其特征在于，所述步骤(3)液相色谱分离具体包括以下步骤：
(3.1)色谱柱以A液平衡，将步骤(2)中已iTRAQ标记的肽段由进样器上样到色谱柱进行分离，流速为1ml/min；液相梯度如下：0-25min，B液线性梯度从0％-10％；25min-32min，B液线性梯度从10％-20％；32min-42min，B液线性梯度从20％-45％；42min-47min，B液线性梯度从45％-100％；47min-52min，B液维持在100％；6...

【专利技术属性】
技术研发人员：常彦红，宋阳，刘锡，叶秀华，田璐，
申请(专利权)人：济宁学院，
类型：发明
国别省市：山东;37