一种比色法测定水产品中游离氨基酸总量的方法技术

本发明专利技术涉及食品检测技术领域，具体是一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定。本发明专利技术优点在于：一是首次提供了一种比色法测定沙虫干中游离氨基酸总量的方法；二是采用三氯乙酸作为提取液，不但提高了提取效率，还有效的去除了水溶性蛋白的干扰；三是该方法具有操作简便、可重复性高、稳定性好，可直观的得出水产品中游离氨基酸的总量等优点。

A colorimetric method for the determination of total free amino acids in aquatic products

【技术实现步骤摘要】
一种比色法测定水产品中游离氨基酸总量的方法
本专利技术涉及食品检测
，具体地说，是一种水产样品中游离氨基酸总量的测定方法。
技术介绍
水产品蕴含着丰富的营养物质，如蛋白质、脂肪、氨基酸、维生素及矿物质等，且肉质鲜美，易于吸收，是人类不可缺少的重要食物之一。鱼虾蟹等各种水产品内含有人体需要的大量必需氨基酸，因此对氨基酸进行定量定性的分析研究具有十分重要的意义。沙虫，学名“方格星虫”，Sipunculusnudus，富含蛋白质、矿物质元素,如钠、钾、水溶性和脂溶性维生素(VB1、VB2、VB4)、牛磺酸以及人体必需氨基酸，具有抗疲劳、抗衰老、提高机体免疫力等功能，是一种高蛋白补品，被誉为“海洋虫草”，具有良好的营养价值和食疗功效。沙虫的食用方式主要有生鲜或加工成可以长期保存的干制品-沙虫干。沙虫干中的8种氨基酸及其他营养成分已在许多文献中进行了分析报道，但简便的直接测定其体内的游离氨基酸总量的方法还未见报道。常见的测定氨基酸的方法有液相法、氨基酸分析仪法及紫外分光光度法等，紫外分光光度法一般用于测氨基酸总量，目前常用的液相法、氨基酸分析仪法可以分析单个组分，但分析总量不如紫外法方便。紫外分光光度法因灵敏度高、反应迅速、操作简单等优势而被广泛用于饮料、茶叶、牛肉等中游离氨基酸总量的测定，但将其用于测定水产品尤其是沙虫干中游离氨基酸总量的研究目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术所存在的上述问题，提供一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法。本专利技术的第一方面，提供一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定，包括以下步骤：A)将水产品样品在60-120℃下烘干1-5h；所述水产品为水产加工品；B)准确称取上述样品1.00～5.00g(精确至±0.01g)(记录为质量m)于50mL离心管中，加入4-25mL的超纯水，静置0.5-5h；C)将上述溶液中加入质量浓度为5-20％的三氯乙酸溶液，体积补齐为25mL(记录为体积V1)，均质；D)将上述混合液放置在4-25℃下，静置0.5-4h；E)将上述溶液在5000-10000rpm下离心5-15min，保留上清液；F)将上述上清液用1-6moml/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.0-8.0；G)将上述溶液准确移取0.20-1.00mL(记录为体积V2)于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL；H)将上述溶液中加入0.5-1mLpH6.0-8.0的磷酸缓冲溶液和0.5-1mL质量分数为1-3％的茚三酮溶液，混合均匀；I)将上述溶液在70-100℃水浴中反应5-30min，流水冷却至室温后，加水定容至刻度(记录为体积V3)，摇匀；J)将上述溶液在570nm波长下，用1cm石英比色皿测定吸光度值；K)将浓度为0.00～40.00μg/mL谷氨酸标准溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL，按照所述步骤(H)～(J)操作，测定吸光度值；L)将上述溶液的吸光度值定义为纵坐标，将谷氨酸浓度定义为横坐标，绘制标准曲线；M)计算所测样品中游离氨基酸的含量。进一步的，所述步骤M中样品中游离氨基酸的含量X按下式(1)计算，计算结果扣除空白值，保留3位有效数字。X＝(C×V3)/1000m×(V1/V2)(1)式中：X—样品中游离氨基酸的含量，单位为克每千克(g/kg)；C—从标准曲线上查得的氨基酸浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；V1—样品总体积，单位为毫升(mL)；V2—测定用试样体积，单位为毫升(mL)；V3—测定用试样定容体积，单位为毫升(mL)；m—样品质量，单位为克(g)。进一步的，所述水产加工品包含但不仅限于沙虫干、油炸基围虾、烤鱿鱼、烤秋刀鱼、烤鲫鱼等。进一步的，所述步骤C)中的三氯乙酸的浓度为10-20％。进一步的，所述步骤I)中的反应温度为80-100℃。进一步的，所述步骤I)中的反应时间为5-25min。本专利技术的第二方面，提供一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定，包括以下步骤：a)准确称取水产品样品1.00～5.00g(精确至±0.01g)于50mL离心管中，加入5-40mL质量浓度为5-20％的三氯乙酸溶液，均质；所述水产品为鲜样水产品；b)将上述混合液放置在4-25℃下，静置0.5-4h；c)将上述溶液在5000-10000rpm下离心5-15min，保留上清液；d)将上述上清液用1-6moml/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.0-8.0；e)将上述溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL；f)将上述溶液中加入0.5-1mLpH6.0-8.0的磷酸缓冲溶液和0.5-1mL质量分数为1-3％的茚三酮溶液，混合均匀；g)将上述溶液在70-100℃水浴中反应5-30min，流水冷却至室温后，加水定容至刻度，摇匀；h)将上述溶液在570nm波长下，用1cm石英比色皿测定吸光度值；i)将浓度为0.00～40.00μg/mL谷氨酸标准溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL，按照所述步骤(f)～(h)操作，测定吸光度值；j)将上述溶液的吸光度值定义为纵坐标，将谷氨酸浓度定义为横坐标，绘制标准曲线；k)计算所测样品中游离氨基酸的含量。进一步的，所述鲜样水产品包括但不仅限于沼虾、草虾、小龙虾、南美白对虾、河虾、中华绒螯蟹、梭子蟹、缢蛏、油蛤、花蛤、牡蛎、鲤鱼、乌鳢、鳊鱼、鲫鱼、鲈鱼、大黄鱼、鳜鱼等。进一步的，所述步骤a)中的三氯乙酸的浓度为10-20％。进一步的，所述步骤g)中的反应温度为80-100℃。进一步的，所述步骤g)中的反应时间为5-25min。本专利技术优点在于：1、本专利技术中采用的三氯乙酸不仅可以作为提取剂，还可以作为沉淀剂，用其效果比纯水好，可以省去再加蛋白沉淀剂这一步骤，大大简化了操作步骤，不但提高了提取效率，还有效的去除了水溶性蛋白的干扰；2、本专利技术首次提出了采用紫外分光光度法测定沙虫干样品中的总游离氨基酸；3、本专利技术可以快速的测定水产品中氨基酸总量，解决了目前仪器昂贵，操作不简便的问题；本专利技术的方法具有操作简便、可重复性高、稳定性好，可直观的得出水产品中游离氨基酸的总量等优点。附图说明图1为不同水产品中游离氨基酸的含量。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，其特征在于，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定，包括以下步骤：/nA)将水产品样品在60-120℃下烘干1-5h；所述水产品为水产加工品；/nB)准确称取上述样品1.00～5.00g于50mL离心管中，加入4-25mL的超纯水，静置0.5-5h；/nC)将上述溶液中加入质量浓度为5-20％的三氯乙酸溶液，体积补齐为25mL，均质；/nD)将上述混合液放置在4-25℃下，静置0.5-4h；/nE)将上述溶液在5000-10000rpm下离心5-15min，保留上清液；/nF)将上述上清液用1-6moml/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.0-8.0；/nG)将上述溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL；/nH)将上述溶液中加入0.5-1mL pH 6.0-8.0的磷酸缓冲溶液和0.5-1mL质量分数为1-3％的茚三酮溶液，混合均匀；/nI)将上述溶液在70-100℃水浴中反应5-30min，流水冷却至室温后，加水定容至刻度，摇匀；/nJ)将上述溶液在570nm波长下，用1cm石英比色皿测定吸光度值；/nK)将浓度为0.00～40.00μg/mL谷氨酸标准溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL，按照所述步骤(H)～(J)操作，测定吸光度值；/nL)将上述溶液的吸光度值定义为纵坐标，将谷氨酸浓度定义为横坐标，绘制标准曲线；/nM)计算所测样品中游离氨基酸的含量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种水产品中游离氨基酸总量的测定方法，其特征在于，采用三氯乙酸作为提取剂，提取液中的游离氨基酸在弱酸性条件下与茚三酮发生显色反应，生成蓝紫色络合物，用紫外分光光度法进行定量测定，包括以下步骤：
A)将水产品样品在60-120℃下烘干1-5h；所述水产品为水产加工品；
B)准确称取上述样品1.00～5.00g于50mL离心管中，加入4-25mL的超纯水，静置0.5-5h；
C)将上述溶液中加入质量浓度为5-20％的三氯乙酸溶液，体积补齐为25mL，均质；
D)将上述混合液放置在4-25℃下，静置0.5-4h；
E)将上述溶液在5000-10000rpm下离心5-15min，保留上清液；
F)将上述上清液用1-6moml/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.0-8.0；
G)将上述溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL；
H)将上述溶液中加入0.5-1mLpH6.0-8.0的磷酸缓冲溶液和0.5-1mL质量分数为1-3％的茚三酮溶液，混合均匀；
I)将上述溶液在70-100℃水浴中反应5-30min，流水冷却至室温后，加水定容至刻度，摇匀；
J)将上述溶液在570nm波长下，用1cm石英比色皿测定吸光度值；
K)将浓度为0.00～40.00μg/mL谷氨酸标准溶液准确移取0.20-1.00mL于25mL比色管中，用超纯水补至1.00mL，按照所述步骤(H)～(J)操作，测定吸光度值；
L)将上述溶液的吸光度值定义为纵坐标，将谷氨酸浓度定义为横坐标，绘制标准曲线；
M)计算所测样品中游离氨基酸的含量。


2.根据权利要求1所述的水产品中游离氨基酸总量的测定方法，其特征在于，所述水产加工品包含但不仅限于沙虫干、油炸基围虾、烤鱿鱼、烤秋刀鱼、烤鲫鱼。


3.根据权利要求1所述的水产品中游离氨基酸总量的测定方法，其特征在于，所述步骤C)中的三氯乙酸的浓度为10-20％。


4.根据权利要求1所述的水产品中游离氨基酸总量的测定方法，其特征在于，所述步骤I中的反应温度为80-100℃。


5.根据权利要求1所述的水产品中游离氨基酸总量的测定方法，其特征在于，所述步骤I中的反应时间为5-...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶洪丽，史永富，田良良，蔡友琼，于慧娟，黄冬梅，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31