人工脂肪组织及其制造方法、人工皮肤的制造方法以及脂肪细胞的培养试剂技术

本发明专利技术公开一种人工脂肪组织，其由含有包含脂肪细胞的细胞和经片段化的细胞外基质的三维组织体形成。

Artificial fat tissue and its manufacturing method, artificial skin manufacturing method and fat cell culture reagent

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人工脂肪组织及其制造方法、人工皮肤的制造方法以及脂肪细胞的培养试剂
本专利技术涉及人工脂肪组织及其制造方法、人工皮肤的制造方法以及脂肪细胞的培养试剂。
技术介绍
成熟脂肪细胞在体外的长期培养维持是化妆品/药品检测或整形手术的领域中特别重要的课题之一。平皿上的现有二维培养的培养时间短，脂肪细胞大部分会在1周后发生去分化。根据现有的报告，单眼成熟脂肪细胞无法维持1周以上(非专利文献1)。另外，在某种程度以上成熟了的脂肪细胞中，由于该细胞内的脂肪滴的影响而有自培养皿漂浮的倾向，因而培养基的更换是困难的。为了解决这些课题，三维细胞培养技术受到关注。WAQARHASSAN等人在由以PEG为基底的共聚物和透明质酸构成的水凝胶中将细胞制成胶囊并进行培养(非专利文献2)。但是，该方法由于是将细胞进行分离培养，因此细胞之间的物理接触难，分化效率差。DAQUINAG等人验证了利用以磁纳米粒子为基础的三维立体结构培养系统，并使用小鼠3T3-L1前脂肪细胞及GFP表达小鼠内皮细胞，同时模拟血管新生和脂质生成。脂肪细胞与内皮细胞的共培养虽然通过免疫染色完美地可见，但14天后的脂肪囊泡非常地小、成熟度低(非专利文献3)。另一方面，就含有脂肪细胞的皮肤模型而言，报告了使用牛I型胶原水凝胶(3mg/mL)、成纤维细胞及脂肪干细胞的2层结构的皮肤模型，但用于皮肤模型构筑的培养需要56天～63天这样非常长的期间。另外，厚度也比人的皮肤薄(非专利文献4)。另外，还报告了利用重悬于人冻干血浆水凝胶(1mg/mL纤维蛋白原)而成的成纤维细胞、或间充质干细胞和脂肪细胞的3层结构得到的皮肤模型，但模型构筑不仅需要35天这样长的培养工艺，而且在形态上也无法模拟人的皮肤结构，是非常薄的(非专利文献5)。现有技术文献非专利文献非专利文献1：TodaS,UchihashiK,AokiS,etal.,Organogenesis.20095(2):50-56非专利文献2：WAQARHASSANETAL.,STEMCELLRESEARCH&THERAPY2013,21；4(2):32非专利文献3：DAQUINAG,ETAL.,TISSUEENGINEERING.PARTC,METHODS,2013May；19(5):336-44.非专利文献4：TROTTIERETAL.,STEMCELLS,2008Oct；26(10):2713-23非专利文献5：MONFORTETAL.,JTissueEngRegenMed.,2013Jun；7(6):479-90
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题本专利技术一实施方式的目的在于提供能够长期间维持的人工脂肪组织及能够在短时间内制造该人工脂肪组织的制造方法。进而，本专利技术一实施方式的目的还在于提供含有能够长期间维持的人工脂肪组织的人工皮肤以及能够在短时间内制造该人工皮肤的制造方法。本专利技术一实施方式的目的还在于提供脂肪细胞的培养试剂及使用上述人工皮肤对化合物的皮肤渗透性进行评价的方法。用于解决技术问题的手段本专利技术人们发现，通过将作为悬浮细胞的脂肪细胞与经片段化的细胞外基质一起进行培养而形成三维组织体，脂肪细胞在短时间内进行分化，且由所形成的三维组织体构成的人工脂肪组织能够长期间维持。进而发现，通过使用该人工脂肪组织，能够制造接近于人的皮肤厚度的人工皮肤。即，本专利技术例如提供以下的[1]～[29]。[1]一种人工脂肪组织，其由三维组织体形成，该三维组织体含有包含脂肪细胞的细胞和经片段化的细胞外基质。[2]上述[1]所述的人工脂肪组织，其中，上述细胞外基质包含胶原。[3]上述[1]或[2]所述的人工脂肪组织，其中，上述细胞外基质的含有率以上述人工脂肪组织为基准计为10重量％～30重量％。[4]上述[1]～[3]中任一项所述的人工脂肪组织，其厚度为1mm～10mm。[5]上述[1]～[4]中任一项所述的人工脂肪组织，其在培养中的收缩率为20％以下。[6]上述[1]～[5]中任一项所述的人工脂肪组织，其中，上述经片段化的细胞外基质的平均长度为100nm～200μm。[7]上述[1]～[6]中任一项所述的人工脂肪组织，其中，上述脂肪细胞的脂肪滴大小的平均值为20μm～180μm。[8]一种人工皮肤，其含有第一层及第二层，第一层由上述[1]～[7]中任一项所述的人工脂肪组织形成。[9]上述[8]所述的人工皮肤，其中，上述第二层含有成纤维细胞。[10]上述[8]或[9]所述的人工皮肤，其进一步含有第三层。[11]上述[10]所述的人工皮肤，其中，上述第三层含有角化细胞。[12]上述[8]～[11]中任一项所述的人工皮肤，其厚度为0.2mm～10mm。[13]一种人工脂肪组织的制造方法，其含有以下工序：(1)在水性介质中使包含脂肪细胞的细胞与经片段化的细胞外基质接触的工序；及(2)对接触了上述经片段化的细胞外基质的上述细胞进行培养的工序。[14]上述[13]所述的制造方法，其中，工序(2)中的培养时间为10天～30天。[15]上述[13]或[14]所述的制造方法，其中，在工序(1)及工序(2)之间进一步含有使水性介质中的上述经片段化的细胞外基质与上述细胞一起沉降的工序。[16]上述[13]～[15]中任一项所述的制造方法，其中，上述细胞外基质包含胶原。[17]上述[13]～[16]中任一项所述的制造方法，其中，上述经片段化的细胞外基质的平均长度为100nm～200μm。[18]一种人工皮肤的制造方法，其含有：(1)在水性介质中使包含脂肪细胞的第一细胞与第一经片段化的细胞外基质接触的步骤；及(2)包含对接触了上述第一经片段化的细胞外基质的上述第一细胞进行培养的步骤的形成第一层的工序；和(3)包含进一步使第二细胞接触于上述第一层、对上述第二细胞进行培养的步骤的形成第二层的工序。[19]上述[18]所述的人工皮肤的制造方法，其中，上述第一经片段化的细胞外基质的平均长度为100nm～200μm。[20]上述[18]或[19]所述的人工皮肤的制造方法，其中，工序(2)中的培养时间为10天～60天。[21]上述[18]～[20]中任一项所述的人工皮肤的制造方法，其中，工序(3)是包含在上述第一层上、在水性介质中使上述第二细胞与经片段化的第二细胞外基质接触、对上述第二细胞进行培养的步骤的工序。[22]上述[21]所述的人工皮肤的制造方法，其中，上述第二细胞外基质包含胶原。[23]上述[18]～[22]中任一项所述的人工皮肤的制造方法，其中，上述第二细胞包含成纤维细胞。[24]上述[18]～[23]中任一项所述的人工皮肤的制造方法，其还含有下述工序：包含进一步使第三细胞接触于上述第二层、对上述第三细胞进行培养的步骤的形成第三层的工本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人工脂肪组织，其由三维组织体形成，该三维组织体含有包含脂肪细胞的细胞和经片段化的细胞外基质。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171110 JP 2017-2178041.一种人工脂肪组织，其由三维组织体形成，该三维组织体含有包含脂肪细胞的细胞和经片段化的细胞外基质。


2.根据权利要求1所述的人工脂肪组织，其中，所述细胞外基质包含胶原。


3.根据权利要求1或2所述的人工脂肪组织，其厚度为1mm～10mm。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的人工脂肪组织，其中，所述经片段化的细胞外基质的平均长度为100nm～200μm。


5.一种人工皮肤，其含有第一层及第二层，第一层由权利要求1～4中任一项所述的人工脂肪组织形成。


6.根据权利要求5所述的人工皮肤，其中，所述第二层含有成纤维细胞。


7.根据权利要求5或6所述的人工皮肤，其进一步含有第三层，所述第三层含有角化细胞。


8.根据权利要求5～7中任一项所述的人工皮肤，其厚度为200μm～10mm。


9.一种人工脂肪的制造方法，其含有以下工序：
(1)在水性介质中使包含脂肪细胞的细胞与经片段化的细胞外基质接触的工序；及
(2)对接触了所述经片段化的细胞外基质的所述细胞进行培养的工序。


10.根据权利要求9所述的制造方法，其中，所述细胞外基质包含胶原。


11.根据权利要求9或10所述的制造方法，其中，所述经片段化的细胞外基质的平均长度为100nm～200μm。


12.一种人工皮肤的制造方法，其含有：
(1)在水性介质中使包含脂肪细胞的第一细胞与第一经片段化的细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：松崎典弥，北野史朗，入江新司，F·路易斯，
申请(专利权)人：凸版印刷株式会社，国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP