一种优化的蝴蝶兰不同花部组织石蜡切片的制作方法技术

本发明专利技术提供一种优化的蝴蝶兰不同花部组织石蜡切片的制作方法，包括以下步骤：(1)固定；(2)脱水；(3)浸蜡；(4)包埋；(5)切片与展片；(6)脱蜡与复水；(7)甲苯胺蓝染色，镜检，根据组织着色深浅进行适当的分化，烤干；(8)透明封片。本发明专利技术针对蝴蝶兰不同花部组织优化了固定，软化和脱水环节试剂的成分和操作时间，更好地保持了切片中细胞的完整性，能清晰区分开未木质化的柔软组织和木质化的较硬组织。

An optimized method of making paraffin sections of different flower tissues of Phalaenopsis

【技术实现步骤摘要】
一种优化的蝴蝶兰不同花部组织石蜡切片的制作方法
本专利技术属于石蜡切片
，具体涉及一种优化的蝴蝶兰不同花部组织石蜡切片的制作方法。
技术介绍
石蜡切片是指通过石蜡包埋的方式对组织进行制片处理，是组织学常用的一种制片方式。目前常规石蜡切片的制作方法存在着一些不足。其中之一是周期较长，做一批所需要的时间长，且手续复杂，步骤多，传统的石蜡切片包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片和粘片、脱蜡、染色、及封片。另外，除了周期长各步骤还同时互相关联，某个步骤的失误会直接影响观察结果，例如脱水、透明、浸蜡、包埋的过程中操作不够严谨，容易使材料变脆，变硬或变形而导致无法继续下一步过程。关于石蜡切片耗时问题上，相关研究在时间和步骤上开展了优化。对茉莉叶石蜡切片繁琐的步骤进行改进，在清洗、脱水、透明、浸蜡等步骤进行时间上的优化，结果比常规节省了1840分钟，且玻片较为清晰[1]。在使用木兰不同时期的花蕾制作切片时，不脱蜡直接进行番红染色，省略一堆繁琐步骤的同时，制片效果也较为不错[2]。常规石蜡切片另外一个缺点是制片过程的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种优化的蝴蝶兰不同花部组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)固定：使用含不同浓度的酒精的FAA固定液对蝴蝶兰花的不同部位进行固定；/n(2)脱水：将不同的花部组织采用依次梯度酒精进行脱水；/n(3)浸蜡：脱水完成后材料在恒温箱中浸入融化石蜡1h，更换三次融化石蜡，每次浸入1h；/n(4)包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋，蜡凝固后修整蜡块；/n(5)切片与展片：切片后漂浮于摊片机温水上将组织展平，烤片；/n(6)脱蜡与复水：依次将切片放入脱蜡剂20分钟后，更换脱蜡剂再脱蜡20分钟，再切换无水乙醇5分钟-无水乙醇5分钟-75％酒精5分钟，自来水冲洗；/n(7)甲苯...

【技术特征摘要】
1.一种优化的蝴蝶兰不同花部组织石蜡切片的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)固定：使用含不同浓度的酒精的FAA固定液对蝴蝶兰花的不同部位进行固定；
(2)脱水：将不同的花部组织采用依次梯度酒精进行脱水；
(3)浸蜡：脱水完成后材料在恒温箱中浸入融化石蜡1h，更换三次融化石蜡，每次浸入1h；
(4)包埋：将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋，蜡凝固后修整蜡块；
(5)切片与展片：切片后漂浮于摊片机温水上将组织展平，烤片；
(6)脱蜡与复水：依次将切片放入脱蜡剂20分钟后，更换脱蜡剂再脱蜡20分钟，再切换无水乙醇5分钟-无水乙醇5分钟-75％酒精5分钟，自来水冲洗；
(7)甲苯胺蓝染色，镜检，根据组织着色深浅进行适当的分化，烤干；
(8)透明封片：二甲苯透明5分钟，使用中性树胶封片，烘干。


2.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤(1)中的FAA固定液分别含50％和70％体积比的酒精；其中含50％体积比酒精的FAA用来固定未木质化组织，如花瓣；含70％体积比酒精的FAA用来固定木质化组织，如花梗。


3.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，当组织为木质化组织时，在所述步骤(1)固定和步骤(2)脱水之间增加软化步骤。


4.根据权利要求1所述的制作方法，其特征在于，所述步骤(2)中对应蝴蝶兰花瓣组织的梯度酒精脱水方法为：75％酒精4小时-85％酒精2小时-90％酒精2小时-95％酒精1小时-无水乙醇30分钟-无水乙醇30分钟-醇苯5分钟-二甲苯5分钟-二甲苯5分钟；对应花梗组织的脱水方法为6...

【专利技术属性】
技术研发人员：李佐，肖文芳，陈和明，吕复兵，
申请(专利权)人：广东省农业科学院环境园艺研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44