特异性识别水稻黑条矮缩病毒p10蛋白的核酸适配体及其筛选方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种特异性识别水稻黑条矮缩病毒p10蛋白的核酸适配体及其筛选方法和用途。本发明专利技术通过一种快速有效的DNA核酸适配体筛选方法，获得了特异性识别水稻矮缩病毒p10蛋白的核酸适配体及其用途。采用本发明专利技术的方法能够减少筛选轮数，缩短筛选时间，能够去除结合到载体上的非特异性核酸适配体，能够筛选出高亲和力核酸适配体，特别是DNA核酸适配体，能够调整多个参数逐步增加筛选过程的严格程度，能够监控核酸适配体的多样性程度和各链丰度。基于特异性结合水稻黑条矮缩病毒p10蛋白的核酸适配体可以简易快捷地进行病毒检测。

Nucleic acid aptamer for specific recognition of p10 protein of rice black stripe dwarf virus and its screening method and Application

【技术实现步骤摘要】
特异性识别水稻黑条矮缩病毒p10蛋白的核酸适配体及其筛选方法和用途
本专利技术属于生物
，涉及一种快速有效的DNA核酸适配体筛选方法、一种特异性识别水稻矮缩病毒p10蛋白的核酸适配体及其用途。
技术介绍
水稻黑条矮缩病毒(Riceblackstreakeddwarfvirus，RBSDV)为呼肠孤病毒科斐济病毒属成员，由介体昆虫灰飞虱传播，广泛侵染水稻、玉米、小麦、大麦、高粱、燕麦等禾本科植物，在水稻中引起水稻黑条矮缩病，在玉米中引起玉米粗缩病。水稻在被RBSDV侵染后表现出矮缩、叶色加深、叶脉出现瘤状凸起等症状。RBSDV在水稻和玉米的整个生育期均可侵染，幼苗期侵染直接导致植株不能抽穗，水稻分蘖期感染RBSDV，虽能抽穗但往往形成包穗，难以结实。近年来RBSDV引起的病毒病对我国的粮食生产造成了严重威胁。针对水稻黑条矮缩病毒的鉴定，目前主要的方法为蛋白质印迹法、酶联免疫吸附测定法、免疫荧光标记法、实时荧光定量PCR法和电镜观察法。前三种方法均基于水稻黑条矮缩病毒编码的蛋白的特异性抗体。然而抗体的制备步骤繁琐，需要使用单克本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列包含TGACACCGTACCTGCTCT(N)

【技术特征摘要】
1.一种核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列包含TGACACCGTACCTGCTCT(N)XAAGCACGCCAGGGACTAT，其中，N为核糖核苷酸或脱氧核苷酸，优选为G、T、A或C，X为50-100之间，优选为60-90，最优选为80的自然数。


2.如权利要求1所述的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列选自SEQIDNO.:6-29中的一个；更优选地，所述核酸适配体的核苷酸序列为SEQIDNO.:6、11、13、15、16、19、21、22或24；最优选地，所述核酸适配体的核苷酸序列为SEQIDNO.:16。


3.如权利要求1或2所述的核酸适配体，其中所述核酸适配体与一种或多种选自荧光分子、放射性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、酶标记和毒素分子的物质连接。


4.如权利要求1至3中任一项所述的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列包括在其一个或多个位置处的磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化和/或同位素化。


5.一种核酸适配体的筛选方法，该筛选方法包括以下步骤：
(1)将靶物质固定于固相载体；
(2)制备单链核酸文库；
(3)将变性后的单链核酸文库和固定于载体的靶物质在溶液中混合，分离未结合的单链核酸与载体-靶物质-单链核酸复合体；
(4)通过洗脱将载体-靶物质-单链核酸复合体中的单链核酸分离；
(5)将分离的单链核酸加入水油混合物，通过匀浆制成水油乳浊液，进行隔离式ePCR扩增；
(6)采用有机溶剂破坏乳浊液，回收水相中的双链核酸分子；
(7)测定ePCR回收产物的产量，依其判定执行下一轮筛选、重复本轮筛选或执行等比放大扩增；
任选地，以后筛选轮次中的单链核酸文库为上一轮ePCR回收产物形成的单链核酸文库；
优选地，所述核酸适配体为DNA；
在步骤(1)中，优选地，所述靶物质为肽；更优选地，所述肽具有连续六个组氨酸序列；优选地，所述肽为病毒外壳蛋白；优选地，所述病毒为水稻黑条矮缩病毒；优选地，所述病毒外壳蛋白为水稻黑条矮缩病毒p10蛋白；

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩秋，王锡民，廖瑾，周益军，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，苏州工业园区新国大研究院，江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG