球状体形成及计数设备、其制造方法、以及利用该设备及方法的球状体培养方法和计数方法技术

本发明专利技术的一个实施例公开一种球状体形成及计数设备，可包括基板和网孔部件，所述网孔部件形成为可位于所述基板的表面，并具有多个突出部件。所述多个突出部件交错成网孔形态，从而可以形成多个孔隙(pore)。

Spheroid formation and counting equipment, manufacturing method, spheroid culture method and counting method by using the equipment and method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】球状体形成及计数设备、其制造方法、以及利用该设备及方法的球状体培养方法和计数方法
本专利技术涉及一种可将球状体以均匀的大小形成并对其进行计数的球状体形成及计数设备、以及利用该设备的球状体培养方法和计数方法。
技术介绍
体内的细胞和组织在以复杂的三维结构彼此作用的同时成长、分化和发展。然而，大部分的细胞培养却在二维的非渗透性的平整的平面上实现。因此，二维细胞培养存在着无法模拟人们体内的细胞环境条件的局限性。近来，作为一种具备有与生物体内同等的功能的三维细胞组织的球状体(spheroid)的培养受到瞩目。为了诱导用于治疗糖尿的胰岛素的正常分泌，在将胰腺细胞进行移植的过程中，使用到将凝集的细胞进行移植的方法等，因此需要球状体的大量生产。此外，随着干细胞研究的成熟，尝试了将干细胞三维培养而应用于各种分化机制的研究的多种方法。作为现有技术中的三维细胞培养方法，存在着悬滴培养法(hanging-dropmethod)、旋转式培养法、离心分离法、微成型(micromolding)法等。然而，通过这种现有技术中的培养法来培养大小均匀的球状体存在局限性。进而，迫切需要一种用于更容易和准确地对这种球状体进行计数的设备，但是迄今为止尚不存在这种设备。
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于，解决如前所述的问题及与之相关联的其他问题。本专利技术的一个示例性目的在于，提供一种用于培养大小均匀的球状体的设备。本专利技术的另一示例性目的在于，提供一种用于更加简便和准确地计数球状体的设备。解决问题的方案根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备可包括：基板；网孔部件，形成为能够位于所述基板的表面，并具有多个突出部件。在实施例中，所述多个突出部件可以交错成网孔形态，从而形成多个孔隙(pore)。在实施例中，所述网孔部件可涂覆有己酰乙二醇壳聚糖(Hexanoylglycolchitosan)。在实施例中，所述孔隙的宽度可以是50至500μm。在实施例中，所述基板的表面可涂覆有己酰乙二醇壳聚糖。在实施例中，所述基板可以是载玻片。在实施例中，当所述网孔部件位于所述基板的表面时，所述网孔部件的未形成所述突出部件的一个表面可与所述基板的表面相接。在实施例中，所述网孔部件与所述基板可通过组装部件而彼此结合。在实施例中，所述突出部件可包括：多个第一突出部件，沿第一方向延伸并彼此隔开布置；多个第二突出部件，沿着与所述第一方向交叉的第二方向延伸，并彼此隔开。根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备的制造方法可包括如下步骤：溶液制造步骤，制造己酰乙二醇壳聚糖溶液；基板涂覆步骤，将所制造的溶液喷射到基板，然后将所述基板进行干燥，从而涂覆所述基板；网孔部件涂覆步骤，将所制造的溶液喷射到网孔部件，然后将所述网孔部件进行干燥，从而涂覆所述网孔部件；组装步骤，利用组装部件而将经涂覆的所述基板与网孔部件进行组装。在实施例中，在所述网孔部件涂覆步骤中，可以在所述网孔部件竖立而固定的状态下将所制造的溶液喷射到所述网孔部件。在实施例中，所述己酰乙二醇壳聚糖溶液可以是0.01至1wt％。根据本专利技术的一个实施例的一种利用球状体形成及计数设备的球状体培养方法可包括如下步骤：将多个细胞播种(seeding)到所述设备；在经过数天之后，获取在所述设备的各个孔隙中观察到的球状体。根据本专利技术的一个实施例的一种利用球状体形成及计数设备的球状体计数方法可包括如下步骤：将球状体喷射到所述设备；沿着与所述设备的一个表面平行的两个方向摇晃所述设备，从而将球状体置于所述设备的各个孔隙；将所述设备置于显微镜的载物台；在移动所述显微镜的像的位置的同时对视场内的球状体进行计数。专利技术效果如果利用根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备，则无需特别的装备或者追加工序而能够以均匀的尺寸大量培养球状体，从而有望在可再生医疗或人工脏器、生物体有用物质生产、新药筛选、动物替代实验法等多样的领域的产业中得到利用。并且，由于根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备被己酰乙二醇壳聚糖(HGC：hexanoylglycolchitosan)涂覆，以最大程度地减少与培养基表面的贴附，因此优点在于，在培养出3D球状体之后，能够简便地进行回收。而且，为了对球状体进行计数，可将根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备放置于现有的容器中使用，因此无需配备专门用于计数的设备，所以费用得到节省，并又非常简便。另外，如前所述的技术效果是示例性的，对于本领域技术人员而言，可从本专利技术的细部构成中预料到或者期望到的效果也可以被附加到本申请专利技术所固有的技术效果中。附图说明图1是用于全局性说明根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备的图。图2为根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备的制造方法的顺序图。图3和图4是用于说明根据本专利技术的一个实施例的球状体形成及计数设备的制造方法的图。图5为根据本专利技术的一个实施例的利用球状体形成及计数设备的球状体培养方法的顺序图。图6至图9是用于说明根据本专利技术的一个实施例的利用球状体形成及计数设备的球状体培养方法的图。图10为根据本专利技术的一个实施例的利用球状体形成及计数设备的球状体计数方法的顺序图。图11和图12是用于说明根据本专利技术的一个实施例的利用球状体形成及计数设备的球状体计数方法的图。具体实施方式以下，参考附图详细说明本说明书中所述的实施例，但与附图标记无关地，对相同或类似的构成要素赋予相同的参考标记，并省略其重复说明。仅考虑到撰写说明书的容易性而赋予或者混用与以下说明中使用的构成要素相关的后缀“模块”和“部”，而它们自身不具有彼此区分的含义或作用。并且，在描述本说明书中公开的实施例的过程中，当认为对相关公知技术的具体说明有可能使本说明书中公开的实施例的要旨混淆时，省略其详细说明。此外，附图仅是为了便于理解本说明书中公开的实施例，本说明书中公开的技术思想并不受附图的限制，本专利技术的思想及技术范围中包含的所有变更、均等物乃至替代物都应该被理解为包含于本专利技术范围。第一、第二等包含序号的术语可用于说明多种构成要素，然而所述构成要素并不受所述的术语的限制。使用所述术语的目的仅在于将一个构成要素与另一构成要素加以区分。当提到一个构成要素“连接”或者“联接”到另一构成要素时，该构成要素可能直接连接或者联接到该其他构成要素，然而可以理解在中间也可能存在其他构成要素。反之，当提到一个构成要素与其他构成要素“直接连接”、“直接联接”时，应理解为中间不存在其他构成要素。除非上下文另外明确指出，否则单数的表述包括复数的表述。在本申请中，“包括”或者“具有”等术语旨在表明说明书中记载的特征、数字、步骤、操作、构成要素、部件或者其组合的存在性，不能理解为预先排除了一个或一个以上的其他特征或者数字、步骤、操作、构成要素、部件或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种球状体形成及计数设备，包括：/n基板；以及/n网孔部件，形成为能够位于所述基板的表面，并具有多个突出部件，/n其中，所述多个突出部件交错成网孔形态，从而形成多个孔隙。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171103 KR 10-2017-01457911.一种球状体形成及计数设备，包括：
基板；以及
网孔部件，形成为能够位于所述基板的表面，并具有多个突出部件，
其中，所述多个突出部件交错成网孔形态，从而形成多个孔隙。


2.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，所述网孔部件涂覆有己酰乙二醇壳聚糖。


3.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，所述孔隙的宽度为50至500μm。


4.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，所述基板的表面涂覆有己酰乙二醇壳聚糖。


5.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，所述基板为载玻片。


6.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，当所述网孔部件位于所述基板的表面时，所述网孔部件的未形成所述突出部件的一个表面与所述基板的表面相接。


7.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，所述网孔部件与所述基板通过组装部件而彼此结合。


8.根据权利要求1所述的球状体形成及计数设备，其中，所述突出部件包括：
多个第一突出部件，沿第一方向延伸并彼此隔开布置；以及
多个第二突出部件，沿着与所述第一方向交叉的第二方向延伸，并彼此隔开。

【专利技术属性】
技术研发人员：姜善雄，许康茂，文盛焕，金多恩，吴惠珉，沈慧恩，
申请(专利权)人：韩国化学研究院，忠南大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR