一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用技术

本发明专利技术涉及一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用，属于兽医技术领域。本发明专利技术采用生物素标记试剂Sulfo‑NHS‑SS‑Biotin标记子孢子，后用细胞裂解液裂解子孢子，并提取子孢子细胞膜蛋白，将获得蛋白利用链霉亲和素‑琼脂糖亲和纯化，后进行质谱鉴定分析，建立一种有效分离子孢子表面蛋白方法，并阐明子孢子表面蛋白谱组成，为筛选有效表面蛋白抗原，获得具有应用潜力的疫苗候选分子组合奠定基础。

A method to analyze the fingerprint of sporozoite surface protein of coccidia and its application

【技术实现步骤摘要】
一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用
本专利技术涉及兽医
，具体涉及一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用。
技术介绍
原虫的抗原蛋白主要包括虫体细胞表面蛋白(包括发育阶段特异性差异蛋白)、入侵相关分泌蛋白、细胞骨架蛋白和生化代谢酶等。虫体表面蛋白是与宿主细胞相互作用的关键分子，直接是最早暴露于宿主免疫系统的抗原物质，最易为宿主模式识别受体所识别。恶性疟原虫、阴道鞭毛虫和布氏锥虫等表面蛋白谱的解析，研究表明表面蛋白不仅直接参与这些寄生原虫的入侵及寄生虫-宿主相互作用网络，也是极具应用前景的保护性抗原。解析球虫表面蛋白谱是筛选基于球虫表面蛋白的高效疫苗候选抗原分子的有效途径和关键步骤。可提取子孢子表面蛋白的方法，具体如鸡球虫子孢子表面蛋白谱的分析鉴定迄今尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法及球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的应用。本专利技术采用生物素标记、膜蛋白提取以及链霉亲和素-琼脂糖亲和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法，包括以下步骤：/n1)用冰PBS缓冲液清洗并悬浮子孢子，得到子孢子悬浮液；/n2)将步骤1)得到的子孢子悬浮液与Sulfo-NHS-SS-Biotin混合，震荡孵育，用冰PBS缓冲液清洗，得到表面蛋白生物素化的子孢子；/n3)将步骤2)得到的表面蛋白生物素化的子孢子悬浮于Hanks氏溶液中，加入细胞裂解液，4℃裂解45～60min，4℃下10000g离心15min，得到上清液；所述细胞裂解液含质量体积分数为1％的TritonX-114、10mmol/LpH值为7.4的Tris·Cl、150mmol/L的NaCl、1mmol/L的EDTA和10μL/...

【技术特征摘要】
1.一种解析球虫子孢子表面蛋白指纹图谱的方法，包括以下步骤：
1)用冰PBS缓冲液清洗并悬浮子孢子，得到子孢子悬浮液；
2)将步骤1)得到的子孢子悬浮液与Sulfo-NHS-SS-Biotin混合，震荡孵育，用冰PBS缓冲液清洗，得到表面蛋白生物素化的子孢子；
3)将步骤2)得到的表面蛋白生物素化的子孢子悬浮于Hanks氏溶液中，加入细胞裂解液，4℃裂解45～60min，4℃下10000g离心15min，得到上清液；所述细胞裂解液含质量体积分数为1％的TritonX-114、10mmol/LpH值为7.4的Tris·Cl、150mmol/L的NaCl、1mmol/L的EDTA和10μL/mL的100×蛋白酶抑制剂储存液体；所述100×蛋白酶抑制剂储存液体为包括终浓度均为10μg/mL的抗痛素、抑胃肽酶和亮抑蛋白酶肽的溶液；
4)将步骤3)得到的上清液在37℃保温3min，25℃下10000g离心1min，收集下层相，得到疏水相蛋白；
5)将步骤4)得到的疏水相蛋白加入经PBS缓冲液洗脱后的链霉亲和素-琼脂糖树脂凝胶过滤柱中，使用PBS缓冲液进行洗脱至洗脱液的吸光值在280nm处达到最低，采用6M盐酸胍溶液或煮沸的含质量百分含量为2％SDS的0.4M尿素溶液进行洗脱，得到生物素标记的子孢子表面蛋白；
6)将步骤5)得到的生物素标记的子孢子表...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲自刚，蔡建平，蒋保余，许笑，王文青，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62