一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条、其制备方法及其检测方法技术

本发明专利技术提供一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，所述桶装胶体金微孔试纸条包括胶体金微孔和检测试纸条；所述胶体金微孔包被有辣椒素单克隆抗体；所述检测试纸条上依次设置有样品垫、包被辣椒素完全抗原的T线、包被羊抗鼠二抗的C线和吸水垫。本发明专利技术所述桶装胶体金微孔试纸条的特异性强、灵敏度高、性能稳定、操作简便、检测结果肉眼可判，其可用于地沟油的快速鉴定，为食品安全市场监管人员提供了便利，为人民群众的健康提供了有力保障。

A barreled colloidal gold microporous strip for the determination of capsaicin in edible oil, its preparation method and detection method

【技术实现步骤摘要】
一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条、其制备方法及其检测方法
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条、其制备方法及其检测方法。
技术介绍
目前，国外对地沟油的检测方法报道较少，其关注点主要集中在预防阶段；而我国国内虽有多达上百种的检测技术，但至今尚未形成统一的国家标准。常规检测方法主要包括水含量测定方法、酸价测定方法等，这些方法虽然简简单易行，但检测灵敏度、特异性及准确性均存在不足；其他的检测方法则包括各类色谱法、色谱-质谱串联测定法等，这些方法虽然检测结果准确，但成本昂贵，不适用于现场大规模筛查。
技术实现思路
鉴于上述问题，本专利技术提供一种以地沟油中的特殊稳定外源性标志物——辣椒素为研究重点，结合免疫学胶体金快速检测技术，开发了一种检测食用油外源标志物辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，该桶装胶体金微孔试纸条的特异性强、灵敏度高、性能稳定、操作简便、检测结果肉眼可判，其可用于地沟油的快速鉴定，为食品安全市场监管人员提供了便利，为人民群众的健康提供了有力保障。胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体反应的一种免疫学分析检测技术。该技术使用方便快速，成本低廉，应用范围广，对人体无毒害，可通过肉眼直接判读检测结果。用于实现上述目的的技术方案如下：本专利技术提供一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，所述桶装胶体金微孔试纸条包括胶体金微孔和检测试纸条；所述胶体金微孔包被有辣椒素单克隆抗体；所述检测试纸条上依次设置有样品垫、包被辣椒素完全抗原的T线、包被羊抗鼠二抗的C线和吸水垫。在一个实施方案中，本专利技术所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条中，所述辣椒素完全抗原的制备方法包括以下步骤：(1)将香兰素胺盐酸盐0.8-1mmol、四氢呋喃5-7ml和三乙胺10-15mmol混合，在室温下搅拌30-40min；(2)将步骤(1)得到的混合物与丁二酸酐1-2mmol混合，在室温下搅拌4-6h；优选地，将步骤(1)得到的混合物与丁二酸酐1-2mmol混合，在室温下搅拌4-6h至TLC监测原料点消失；(3)将步骤(2)得到的混合物与水10-12mL、乙酸乙酯8-10mL混合，在室温下搅拌3-5min；(4)将步骤(3)得到的混合物与饱和碳酸氢钠5-7mL混合，搅拌均匀，分液，后将水相的pH调至2-3；(5)将步骤(4)得到的混合物用乙酸乙酯8-10mL萃取2～3次，合并得到的乙酸乙酯相，干燥，后用3-4mL甲醇进行重结晶，得到如式I所示的辣椒素半抗原；其中所述辣椒素半抗原的分子式为C12H15NO5，相对分子量为253.2；(6)将步骤(5)得到的辣椒素半抗原0.1-0.15mmol与DMF200-300μL、三正丁胺0.1-0.2mmol、氯甲酸异丁酯0.1-0.2mmol混合，震荡1-2h；(7)将步骤(6)得到的混合物与牛血清白蛋白混合，在室温下搅拌4-6h，后置于浓度为0.01M的磷酸盐缓冲液中透析，收集透析液，得到如式II所示的辣椒素完全抗原；优选地，每12h更换一次所述磷酸盐缓冲液；优选地，所述牛血清白蛋白的浓度为5-6mg/ml；优选地，所述辣椒素半抗原与所述牛血清白蛋白的偶联比为60～70:1；优选地，所述透析温度为4～8℃；优选地，所述透析时间为2～3天；在一个实施方案中，本专利技术所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条中，所述胶体金微孔的制备方法包括：(1)将加热至沸腾的质量分数为0.02％的氯金酸水溶液与质量体积比为10％的柠檬酸三钠溶液混合，继续煮沸，冷却后得到胶体金溶液；优选地，所述氯金酸与所述柠檬酸三钠的质量比为1:1.2；(2)向步骤(1)得到的胶体金溶液中添加0.1mol/L的K2CO3溶液至pH为6.0～6.5；(3)将步骤(2)得到的溶液与辣椒素单克隆抗体的稀释液混合，反应20～30min；后添加质量分数为1～2％的牛血清白蛋白溶液进行封闭，离心，弃去上清液，取沉淀物；其中，所述步骤(2)得到的溶液与所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的体积比为25:2；所述牛血清白蛋白与所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的体积比为5:4；所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的制备方法为：将辣椒素单克隆抗体与水混合至浓度为8-10μg/mL；所述辣椒素单克隆抗体为中国农业科学院油料作物研究所制备的、编号为YQQD8细胞株产生的抗辣椒素单克隆抗体，该YQQD8细胞株冻存于中国农业科学院油料作物研究所；优选地，所述辣椒素单克隆抗体的浓度为6.0mg/mL；(4)将步骤(3)得到的沉淀物与浓度为0.2mol/L的硼酸盐缓冲液混合，得到混合物，将该混合物添加至微孔中，冻干，得到胶体金微孔；优选地，所述步骤(3)得到的沉淀物与所述硼酸盐缓冲液的体积比为1:8～10；优选地，所述硼酸盐缓冲液的pH为8.5～9；优选地，将所述胶体金微孔于温度为2～8℃下保存，优选地，将所述胶体金微孔于温度为4℃下保存；优选地，所述步骤(4)中的冻干程序依次为：在温度为-50℃下保持4-6h；在温度为-25℃下保持4-6h；在温度为-15℃下保持4-6h；在温度为5℃下保持4-6h；在温度为25℃下保持6-8h。在一个实施方案中，本专利技术所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条中，所述样品垫的制备方法为：将玻璃纤维垫浸泡于0.04-0.06mol/L的磷酸缓冲液中，后晾干；其中所述磷酸缓冲液含有体积分数为0.3～0.5％的曲拉通X-100。在一个实施方案中，本专利技术所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条中，所述检测试纸条为硝酸纤维素膜；优选地，所述吸水垫为吸水性材料。在一个实施方案中，本专利技术所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条中，所述包被辣椒素完全抗原的T线的划线方法为：将所述辣椒素完全抗原与水混合至浓度为5～6mg/ml的辣椒素完全抗原溶液；将得到的辣椒素完全抗原溶液与磷酸盐缓冲液混合，得到T线包被溶液；将得到的T线包被溶液在所述检测试纸条上划膜，后置于温度为50～60℃下烘烤12～18h；其中，所述T线包被溶液的浓度为1-1.5mg/ml；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.03mol/L，优选0.02mg/ml；所述磷酸盐缓冲液中含有质量分数为0.5～1％的海藻糖。在一个实施方案中，本专利技术所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条中，所述包被羊抗鼠二抗的C线的划线方法为：将所述羊抗鼠二抗与磷酸盐缓冲液混合，得到C线包被溶液；将得到的C线包被溶液在所述检测试纸条上划膜，后置于温度为50～60℃下烘烤12～18h；其中，所述羊抗鼠二抗的浓度为12.5～14.5mg/ml；优选13.7mg/ml；所述C线包被溶液的浓度为1-1.5mg/ml；所述磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，所述桶装胶体金微孔试纸条包括胶体金微孔和检测试纸条；/n所述胶体金微孔包被有辣椒素单克隆抗体；/n所述检测试纸条上依次设置有样品垫、包被辣椒素完全抗原的T线、包被羊抗鼠二抗的C线和吸水垫。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，所述桶装胶体金微孔试纸条包括胶体金微孔和检测试纸条；
所述胶体金微孔包被有辣椒素单克隆抗体；
所述检测试纸条上依次设置有样品垫、包被辣椒素完全抗原的T线、包被羊抗鼠二抗的C线和吸水垫。


2.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述辣椒素完全抗原的制备方法包括以下步骤：
(1)将香兰素胺盐酸盐0.8-1mmol、四氢呋喃5-7ml和三乙胺10-15mmol混合，在室温下搅拌30-40min；
(2)将步骤(1)得到的混合物与丁二酸酐1-2mmol混合，在室温下搅拌4-6h；
优选地，将步骤(1)得到的混合物与丁二酸酐1-2mmol混合，在室温下搅拌4-6h至TLC监测原料点消失；
(3)将步骤(2)得到的混合物与水10-12mL、乙酸乙酯8-10mL混合，在室温下搅拌3-5min；
(4)将步骤(3)得到的混合物与饱和碳酸氢钠5-7mL混合，搅拌均匀，分液，后将水相的pH调至2-3；
(5)将步骤(4)得到的混合物用乙酸乙酯8-10mL萃取2～3次，合并得到的乙酸乙酯相，干燥，后用3-4mL甲醇进行重结晶，得到如式I所示的辣椒素半抗原；其中所述辣椒素半抗原的分子式为C12H15NO5，相对分子量为253.2；



(6)将步骤(5)得到的辣椒素半抗原0.1-0.15mmol与DMF200-300μL、三正丁胺0.1-0.2mmol、氯甲酸异丁酯0.1-0.2mmol混合，震荡1-2h；
(7)将步骤(6)得到的混合物与牛血清白蛋白混合，在室温下搅拌4-6h，后置于浓度为0.01M的磷酸盐缓冲液中透析，收集透析液，得到如式II所示的辣椒素完全抗原；
优选地，每12h更换一次所述磷酸盐缓冲液；
优选地，所述牛血清白蛋白的浓度为5-6mg/ml；
优选地，所述辣椒素半抗原与所述牛血清白蛋白的偶联比为60～70:1；
优选地，所述透析温度为4～8℃；
优选地，所述透析时间为2～3天；





3.根据权利要求1所述的检测食用油中辣椒素的桶装胶体金微孔试纸条，其特征在于，所述胶体金微孔的制备方法包括：
(1)将加热至沸腾的质量分数为0.02％的氯金酸水溶液与质量体积比为10％的柠檬酸三钠溶液混合，继续煮沸，冷却后得到胶体金溶液；优选地，所述氯金酸与所述柠檬酸三钠的质量比为1:1.2；
(2)向步骤(1)得到的胶体金溶液中添加0.1mol/L的K2CO3溶液至pH为6.0～6.5；
(3)将步骤(2)得到的溶液与辣椒素单克隆抗体的稀释液混合，反应20～30min；后添加质量分数为1～2％的牛血清白蛋白溶液进行封闭，离心，弃去上清液，取沉淀物；
其中，所述步骤(2)得到的溶液与所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的体积比为25:2；
所述牛血清白蛋白与所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的体积比为5:4；
所述辣椒素单克隆抗体的稀释液的制备方法为：将辣椒素单克隆抗体与水混合至浓度为8-10μg/mL；
优选地，所述辣椒素单克隆抗体的浓度为6.0mg/mL；
(4)将步骤(3)得到的沉淀物与浓度为0.2mol/L的硼酸盐缓冲液混合，得到混合物，将该混合物添加至微孔中，冻干，得到胶体金微孔；
优选地，所述步骤(3)得到的沉淀物与所述硼酸盐缓冲液的体积比为1:8～10；
优选地，所述硼酸盐缓冲液的pH为8.5～9；
优选地，将所述胶体金微孔于温度为2～8℃下保存，优选地，将所述胶体金微孔于温度为4℃下保存；
优选地，所述步骤(4)中的冻干程序依次为：在温度为-50℃下保持4-6h；在温度为-25℃下保持4-...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨浩，闫彩霞，吴慧，余箭翔，华权高，田国军，
申请(专利权)人：武汉华美维士康生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42