快速检测杭白菊中三种真菌的引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测杭白菊中三种真菌的引物组、试剂盒及方法，针对病原菌在杭白菊不同的发育时期和环境条件下所表现的症状可能一样的问题以及现有检测方法耗时久的问题。本发明专利技术利用巢氏多重PCR建立了一种对杭白菊上三种主要病原菌的多目标快速检测的引物组和方法，整个检测流程只需要5～6个小时，方法的检出限可以达到1ng/μL，且检出率可达90％以上。该方法能更快、更准确地检测病原体，甚至可以在杭白菊未出现病害表征时检测到相应的病原菌。

【技术实现步骤摘要】
快速检测杭白菊中三种真菌的引物组、试剂盒及方法
本专利技术涉及微生物
，特别是涉及一种快速检测杭白菊中三种主要真菌引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
杭白菊(ChrysanthemummorifoliumRamat)又称小汤黄、甘菊、茶菊，菊科菊属多年生草本植物，是我国传统的药用栽培植物和浙江省八大药材“浙八味”之一，主产地为浙江省桐乡市。2010年版《中国药典》将杭白菊、贡菊、滁菊、亳菊列为中国的“四大”驰名药用菊花，作为卫生部首批批准的药食同源的道地药材之一。杭白菊以干燥头状花序入药，主要成分为黄酮类、绿原酸、糖类、挥发油等。现代药理学研究表明，杭白菊具有舒血管、降血脂、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、驱铅等多种药理作用。目前浙江杭白菊常年种植面积约7万亩，干花总产量达到5000-7000吨，年均总产值超过5亿元，占全国菊花总销量的近90％。随着杭白菊知名度的提高，其种植规模也在不断的扩增，但由于种植技术的不规范加上农药的乱用滥用，使得植株抗病性减弱、病原累积严重、病虫害大量爆发，农药的滥用乱用，严重影响了杭白菊的产量与质量。因此，及早诊断本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.快速检测杭白菊中三种真菌的引物组，其特征在于所述三种真菌分别为球毛壳菌Chaetomium globosum、半裸镰刀菌Fusariuminarnatum和互隔交链孢菌Alternariaalternata；所述的引物组包括三对特异性引物对，每对特异性引物对的具体引物序列如下：/n特异性引物对一：/n正向引物QM5-F：CGTTACCTATACCGTTGC；/n反向引物QM5-R：AGAGCGAGATGTATGCTACT；/n特异性引物对二：/n正向引物HG1-F：GAGGACCCTAAACTCTGTT；/n反向引物HG1-R：ATGATTACTACGCTATGGAA；/n特异性引物对三：...

【技术特征摘要】
1.快速检测杭白菊中三种真菌的引物组，其特征在于所述三种真菌分别为球毛壳菌Chaetomiumglobosum、半裸镰刀菌Fusariuminarnatum和互隔交链孢菌Alternariaalternata；所述的引物组包括三对特异性引物对，每对特异性引物对的具体引物序列如下：
特异性引物对一：
正向引物QM5-F：CGTTACCTATACCGTTGC；
反向引物QM5-R：AGAGCGAGATGTATGCTACT；
特异性引物对二：
正向引物HG1-F：GAGGACCCTAAACTCTGTT；
反向引物HG1-R：ATGATTACTACGCTATGGAA；
特异性引物对三：
正向引物Al-F：GTCTTTTGCGTACTTCTTGTTT；
反向引物Al-R：GAACAGGCATGCCCTTTGGA。


2.一种快速检测杭白菊中三种真菌的试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的引物组。


3.如权利要求2所述的快速检测杭白菊中三种真菌的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中引物浓度均为10μM/L，包含QM5-F/QM5-R0.6μL、HG1-F/HG1-R1μL、Al-F/Al-R1.6μL。


4.如权利要求2所述的快速检测杭白菊中三种真菌的试剂盒，其特征在于还包括真菌通用引物对，其序列如下：
ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG；
ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC。


5.一种快速检测杭白菊中三种真菌的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)带病植株DNA的提取：
取带病植物组织，于液氮中冷冻后打碎成粉末，提取其DNA；
2)巢氏多重PCR的扩增：
第一轮PCR使用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增带病植株中病原真菌的ITS序列，其中ITS1序列如SEQIDNo.7所示，ITS4序列如SEQIDNo.8所示；
第二轮PCR使用第一轮PCR的产物作为模板，采用权利要求1中的引物组作为引物；
3)扩增结果的检测：
根据步骤2)扩增出的条带片段大小判断其对应的病原真菌；其中球毛壳菌C.globo...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋阳，申屠旭萍，曹瑱艳，俞晓平，许益鹏，刘光富，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33