快速检测浙贝母中两种真菌的引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测浙贝母中两种真菌的引物组、试剂盒及方法，针对病原菌在浙贝母不同的发育时期和环境条件下所表现的症状可能一样的问题以及现有检测方法耗时久的问题。本发明专利技术利用巢氏多重PCR建立了一种对浙贝母上两种主要病原菌的多目标快速检测的引物组和方法，方法的检出限可以达到100pg/μL，且检出率几乎可达100％。该方法可以提高检测的灵敏度还可以实现多种病原菌的多目标快速检测。

Rapid detection of two fungi in Fritillaria thunbergii by primer set, kit and method

【技术实现步骤摘要】
快速检测浙贝母中两种真菌的引物组、试剂盒及方法
本专利技术涉及微生物
，特别是涉及一种快速检测浙贝母中两种真菌引物组、试剂盒及方法。
技术介绍
麦浙贝母(Fritillariathunbergii)，多年生草本。鳞茎半球形，贝母系百合科贝母种属多年生草本植物。作为“浙八味”的中药之一，浙贝母具有极高的药用应用价值，其鳞茎部位具有止咳化痰、清热解毒、开郁散结之功效。浙江省宁波市鄞州章水镇是浙贝母的主产地，目前全省浙贝母播种面积高达5万亩，产值占全国总量的90％。随着中药日益受到大家的认可，加上浙贝母产品质优，使的其在国内外市场上均享有极高的声誉，成为浙江省主要出口与重点发展的药材品种之一。伴随着市场的扩大，浙贝母的种植规模也在不断的扩增，但由于种植技术的不规范加上农药的乱用滥用，使得植株抗病性减弱、病原累积严重、病虫害大量爆发，农药的滥用乱用，严重影响了浙贝母的产量与质量。因此，及早诊断，及早防治浙贝母病害是提高浙贝母产量与质量至关重要一环。经田间调查发现炭疽病和干腐病是浙贝母病害中两种发生频率最高的真菌病害，引起这两种病害的病原菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.快速检测浙贝母中两种真菌的引物组，其特征在于，所述两种真菌分别为细线炭疽菌Colletotorichum lineola和尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum；所述的引物组包括两对特异性引物对，每对特异性引物对的具体引物序列如下：/n特异性引物对一：/n正向引物BMTJ4-F：CTACACCCTTTGTGACATACC；/n反向引物BMTJ4-R：CGAGACGTTAGTTACTACGC；/n特异性引物对二：/n正向引物FO1-F：AACCCCTGTGAACATACCACTTG；/n反向引物FO1-R：GAGGAACGCGAATTAACGCGAC。/n

【技术特征摘要】
1.快速检测浙贝母中两种真菌的引物组，其特征在于，所述两种真菌分别为细线炭疽菌Colletotorichumlineola和尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum；所述的引物组包括两对特异性引物对，每对特异性引物对的具体引物序列如下：
特异性引物对一：
正向引物BMTJ4-F：CTACACCCTTTGTGACATACC；
反向引物BMTJ4-R：CGAGACGTTAGTTACTACGC；
特异性引物对二：
正向引物FO1-F：AACCCCTGTGAACATACCACTTG；
反向引物FO1-R：GAGGAACGCGAATTAACGCGAC。


2.一种快速检测浙贝母中两种真菌的试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的引物组。


3.如权利要求2所述的快速检测浙贝母中两种真菌的试剂盒，其特征在于所述试剂盒中引物浓度均为10μM/L，包含BMTJ4-F/BMTJ4-R0.6μL、FO1-F/FO1-R1μL。


4.如权利要求2所述的快速检测浙贝母中两种真菌的试剂盒，其特征在于还包括真菌通用引物对，其序列如下：
ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG；
ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC。


5.一种快速检测浙贝母中两种真菌的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)带病植株DNA的提取：
取带病植物组织，于液氮中冷冻后打碎成粉末，提取其DNA；
2)巢氏多重PCR的扩增：
第一轮PCR使用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增带病植株中病原真菌的ITS序列，其中ITS1序列如SEQIDNo.5所示，ITS4序列如SEQIDNo.6所示；
第二轮PCR使用第一轮PCR的产物作为模板，采用权利要求1中的引物组作为引物；
3)扩增结果的检测：
根据步骤2)扩增出的条带片段大小判断其对应的病原真菌；其中细线炭疽菌C.lineola目的片段大小为421bp；尖孢镰刀菌F.oxysporu...

【专利技术属性】
技术研发人员：申屠旭萍，曹瑱艳，宋阳，俞晓平，许益鹏，刘光富，张蓬军，
申请(专利权)人：中国计量大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33