用于检测猫泛白细胞减少症病毒的RPA-FLD方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的RPA‑FLD方法，包括以下步骤：S1：合成RPA特异性引物组和探针；S2：提取待检测样品中的DNA；S3：RPA扩增反应：以提取的DNA为模板、探针、步骤S1中的RPA特异性引物组为引物、缓冲液、醋酸镁溶液以及ddH

Rpa-fld method for detection of feline panleukopenia virus

【技术实现步骤摘要】
用于检测猫泛白细胞减少症病毒的RPA-FLD方法
本专利技术属于分子生物学和免疫学
，具体涉及一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的RPA-FLD方法。
技术介绍
传统猫泛白细胞减少症病毒的鉴定主要通过血凝实验、血凝抑制实验和传统的酶联免疫检测方法进行。对于血凝或血凝抑制实验来说，由于猫泛白细胞减少症病毒血凝活性弱且该方法对操作条件要求较高，且相关实验条件较为苛刻，如凝集的发生温度(4℃)、凝集细胞类型(猪、猴红细胞)等，故在临床检测中，常易出现假阴性结果，从而易对检测结果造成误判；酶联免疫法对动物血清、组织悬液或病毒培养物均可进行检测，但由于耗时较长且需要特殊仪器，如：酶标仪，恒温培养箱等仪器的支持，难以在快速检测领域推广使用。随着分子生物学检测技术的发展，通过对猫泛白细胞减少症病毒保守序列的扩增，建立的PCR技术已成功应用于猫泛白细胞减少症病毒的实验室诊断，并且特异性强、灵敏度高，但与酶联免疫方法类似，必须配备相关的仪器设备，相关检测人员也需具有相应的技术能力，导致该方法在基层的适用性受限。作为新型的核酸等温扩增技术，重组本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的RPA-FLD方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：合成RPA特异性引物组和探针；/nS2：提取待检测样品中的DNA；/nS3：RPA扩增反应：以提取的DNA为模板、探针、步骤S1中的RPA特异性引物组为引物、缓冲液、醋酸镁溶液以及ddH

【技术特征摘要】
1.一种用于检测猫泛白细胞减少症病毒的RPA-FLD方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：合成RPA特异性引物组和探针；
S2：提取待检测样品中的DNA；
S3：RPA扩增反应：以提取的DNA为模板、探针、步骤S1中的RPA特异性引物组为引物、缓冲液、醋酸镁溶液以及ddH2O在RPA反应管中进行RPA扩增反应；
S4：采用量子点荧光免疫层析法对步骤S3得到的扩增产物进行分析；
其中：RPA特异性引物组包括上游引物和下游引物，上游引物和下游引物的核苷酸序列为：
FPV-RPA-VP2-F：5’-AGCAGACTTGTACATTTAAATATGCCAGAAAGTGAAA-3’,
FPV-RPA-VP2-R：5’-TTCTTGTTCAAAACTAACTAAATGCAACTCACTCA-3’,
FPV-RPA-VP2-R的5’端被生物素标记；
探针的核苷酸序列由两部分连接而成，分别为第一部分和第二部分，其中第一部分的核苷酸序列为：5’-AGGAAACATGGCTTTAGATGATATTCATGTACA-3’,第二部分的核苷酸序列为：5’-AATTGTAACACCTTGGT-3’,
第一部分的5’端连接羧基荧光素，第二部分的3’端连接磷酸，第一部分的3’端和第二部分的5’端之间通过四氢呋喃连接。


2.根据权利要求1所述的RPA-FLD方法，其特征在于，步骤S3中扩增温度为33～42℃，反应时间为20min-30min。


3.根据权利要求1所述的RPA-FLD方法，其特征在于，步骤S4具体为：
向步骤S3得到的扩增产物中加入侧向层析缓冲液进行稀释，稀释完成后加入到量子点荧光免疫层试纸条的进样孔内即可。


4.根据权利要求1所述的RPA-FLD方法，其特征在于，步骤S4中所述量子点荧光免疫层析法中使用的试纸条中设置有量子点标记的鼠源羧基荧光素抗体、亲和素检测线以及兔抗鼠抗体质控线。


5.根据权利要求4所述的RPA-FLD方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：代兵，张政委，章先，汪行舟，李调调，杨佩瑜，李雷，汪米佳，王平，陈利瑶，刘琴，郑跃军，刘有根，何银余，李春霞，毛婷逸，艾锡，
申请(专利权)人：浙江农林大学，浙江国正检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33