多特异性抗体制造技术

本发明专利技术涉及多特异性抗体及其药物组合物和使用方法，所述多特异性抗体包含至少一个CD137结合结构域和至少一个PDL1结合结构域。本发明专利技术还涉及编码所述多特异性抗体的核酸、包含所述核酸的载体、包含所述核酸或所述载体的宿主细胞以及生产所述多特异性抗体的方法。

polyspecific antibody

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多特异性抗体
本专利技术涉及多特异性抗体及其药物组合物和使用方法，所述多特异性抗体包含至少一个CD137结合结构域和至少一个PDL1结合结构域。本专利技术还涉及编码所述多特异性抗体的核酸、包含所述核酸的载体、包含所述核酸或所述载体的宿主细胞以及生产所述多特异性抗体的方法。
技术介绍
肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)是受体的蛋白质超家族，其特征在于它们能够通过细胞外结构域中富含半胱氨酸的假重复序列(pseudorepeat)与肿瘤坏死因子(TNF)结合(Locksley等人,2001,Cell.104:487–501)。目前，已经鉴定出了27个TNF家族成员。TNFRSF成员及其配体主要在免疫细胞上表达，它们在T细胞介导的免疫应答中发挥免疫调节剂的作用。TNFRSF成员在增强树突状细胞的存活和T细胞的启动能力、效应T细胞的最佳生成、最佳抗体应答以及炎症反应的扩大中发挥作用。CD137(4-1BB，TNF-受体超家族9，TNFRSF9)是TNFR超家族的表面糖蛋白。它是一种诱导型共刺激性T细胞受体。CD137表达是激活依赖性的，并且涵盖了广泛的免疫细胞子集，包括活化的NK和NKT细胞、调节性T细胞、树突细胞(DC)(包括滤泡DC)、刺激后的肥大细胞、分化髓样细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞(Wang等人,ImmunolRev.229(1):192-215(2009))和活化的B细胞(Zhang等人,JImmunol.184(2):787-795(2010))。另外，还在肿瘤脉管系统(BroilK等人,AmJClinPathol.115(4):543-549(2001)；Seaman等人,CancerCell11(6):539-554(2007))和动脉粥样硬化内皮细胞(Olofsson等人,Circulation117(10):12921301(2008))上证明了CD137表达。CD137-配体(CD137L，4-1BBL或tnfsf9)，一种TNF家族的分子，是一种已知的CD137的细胞间天然配体(Alderson,M.R.等人,Eur.J.Immunol.24:2219–2227(1994)；PollokK.等人,Eur.J.Immunol.24:367-374(1994)；Goodwin,R.G.等人,Eur.J.Immunol.23:2631–2641(1993))。CD137的配体形成同型三聚体，CD137信号传导从细胞表面的连接的分子发生，这些分子被三聚化的配体交联(Won,E.Y.等人,J.Biol.Chem.285:9202–9210(2010))。因此有人提出，CD137的高阶聚集是介导信号传导所必需的。CD137在其细胞质尾中与衔接子TRAF-2和TRAF-1缔合，导致共免疫沉淀，这在T细胞中CD137激活后有所增强(Saoulli,K.等人,J.Exp.Med.187:1849–1862(1998)；Sabbagh,L.等人,J.Immunol.180:8093–8101(2008))。CD137招募TRAF-1和TRAF-2会导致NFKB和丝裂原活化蛋白(MAP)激酶级联反应(包括ERK、JNK和p38MAP激酶)的下游活化。NFkB激活导致Bcl-2家族的促存活成员Bfl-1和Bcl-XL上调。促凋亡蛋白Bim以TRAF-1和ERK依赖性方式下调(Sabbagh等人,JImmunol.180(12):8093-8101(2008))。有人提出，CD137的主要作用是将两个或更多个TRAF-2分子彼此紧密地放置(Sanchez-Paulete,A.R.等人,Eur.J.Immunology46(3):513-522(2016))。基于此，推测驱动CD137信号传导的主要因素是细胞质膜的微片(micropatch)中TRAF-2组装的CD137部分的相对密度(Sanchez-Paulete,A.R.等人,Eur.J.Immunology46(3):513-522(2016))。总体而言，多聚作用会促进CD137信号传导，有人提出，交联的CD137分子是CD137共刺激活性的关键因素。CD137共同刺激T细胞以执行效应子功能，例如根除已建立的肿瘤、扩大原发性CD8+T细胞应答和增加抗原特异性CD8+T细胞的记忆库、诱导干扰素-γ(IFN-γ)合成。通过操纵CD137/CD137L功能可以将CD137刺激在CD8+T细胞功能和存活中的关键作用潜在地用于治疗肿瘤。实际上，小鼠体内功效研究表明，抗CD137抗体治疗会导致多种肿瘤模型的的肿瘤消退。例如，已证明激动性抗小鼠CD137抗体会诱导针对P815肥大细胞瘤肿瘤和低免疫原性肿瘤模型Ag104的免疫应答(I.Melero等人,Nat.Med.,3(6):682-5(1997))。在一些研究中已经报道了CD137激动剂mAb在单一疗法和组合疗法的预防性和治疗性环境中以及抗肿瘤保护性T细胞记忆应答中的功效(Lynch等人,ImmunolRev.222:277-286(2008))。CD137激动剂还在多种自身免疫模型中抑制自身免疫反应(Vinay等人,JMolMed84(9):726-736(2006))。目前临床上的两种抗CD137抗体是urelumab(Bristol-MyersSquibb)，其是一种完全人源化的IgG4mAb，和utomilumab(PF-05082566，Pfizer)，其是一种全人IgG2mAb(ChesterC.等人,CancerImmunolImmunotherOct；65(101243-8(2016))。尽管利用激动CD137的治疗性抗体是非常有前途的治疗策略，但它还伴随着诸如抗CD137激动剂抗体的低功效、高毒性和不良反应等困难。已证明，CD137激动剂抗体可导致免疫系统和器官功能改变，增加毒性风险。据报道，在幼稚荷瘤小鼠中高剂量的CD137激动剂抗体可诱导T细胞向肝细胞浸润以及天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶升高，这符合肝脏炎症(NiuL等人JImmunol178(7):4194–4213(2007)；DubrotJ等人,IntJCancer128(1):105–118(2011))。针对CD137激动剂抗体的人类治疗用途的初步临床研究还证明了肝酶的升高和肝炎发病率的增加(SznolM.等人,JClinOncol26(115S):3007(2008)；AsciertoPA等人,SeminOncol37(5):508–516(2010)；ChesterC.等人,CancerImmunolImmunotherOct；65(10):1243-8(2016))。在先前治疗过的III/IV期黑色素瘤的Bristol-MyersSquibb(BMS)II期抗CD137研究(国家临床试验(NCT)00612664)中，观察到了潜在的致命性肝炎。该研究及其他一些研究(NCT00803374、NCT00309023、NCT00461110、NCT00351325)因不良事件而终止(ChesterC.等人,CancerImm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多特异性抗体，其包含：/na)至少一个CD137结合结构域(CD137-BD)；和/nb)至少一个PDL1结合结构域(PDL1-BD)，/n其中所述CD137-BD与人CD137结合的解离常数(KD)比所述PDL1-BD与人PDL1结合解离常数(KD)高至少5倍，优选至少10倍，例如至少50倍，至少100倍，至少200倍，至少300倍，至少400倍，更优选至少500倍，例如至少600倍，至少700倍，至少800倍，至少900倍，至少1,000倍。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171010 EP 17195779.8;20180105 EP 18150465.5;20181.一种多特异性抗体，其包含：
a)至少一个CD137结合结构域(CD137-BD)；和
b)至少一个PDL1结合结构域(PDL1-BD)，
其中所述CD137-BD与人CD137结合的解离常数(KD)比所述PDL1-BD与人PDL1结合解离常数(KD)高至少5倍，优选至少10倍，例如至少50倍，至少100倍，至少200倍，至少300倍，至少400倍，更优选至少500倍，例如至少600倍，至少700倍，至少800倍，至少900倍，至少1,000倍。


2.根据权利要求1所述的多特异性抗体，其中所述抗体对于CD137特异性是单价、二价或多价的，优选地是单价的，并且，任选地，其中所述抗体对于PDL1特异性是单价、二价或多价的，优选地是单价的。


3.根据权利要求1至2中任一项所述的多特异性抗体，其中所述抗体还包含至少一个人血清白蛋白结合结构域，优选一个人血清白蛋白结合结构域。


4.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性抗体，其中所述CD137-BD是CD137的激动剂。


5.根据权利要求4所述的多特异性抗体，其中所述CD137-BD：
a)与人CD137结合的解离常数(KD)小于50nM，特别是小于10nM，特别是小于5nM，特别是小于1nM，特别是小于500pM，更特别是小于100pM，更特别是小于50pM，特别地，其中所述抗体是scFv(单价亲和力)；
b)与人CD137结合的Koff速率为10-3s-1或更低，或10-4s-1或更低，或10-5s-1或更低，如通过SPR所测量的，特别地，其中所述抗体是scFv；
c)与人CD137结合的Kon速率为至少104M-1s-1或更高，至少105M-1s-1或更高，至少106M-1s-1或更高，如通过SPR所测量的，特别地，其中所述抗体是scFv；
d)任选地，不与urelumab交叉竞争；
e)任选地，不与utomilumab交叉竞争；和/或
f)与食蟹猕猴(食蟹猴)CD137交叉反应。


6.根据权利要求4或权利要求5所述的多特异性抗体，其中所述CD137-BD包含
(i)
a)分别为SEQIDNO：59、60和61的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQIDNO：74、75和76的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；或
b)分别为SEQIDNO：1、2和3的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQIDNO：18、19和20的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；和
(ii)VH3或VH4结构域框架序列FR1至FR4；优选VH3结构域框架序列FR1至FR4；和
(iii)VL结构域，其包含VL框架，所述VL框架包含Vκ框架FR1、FR2和FR3，特别是Vκ1或Vκ3FR1至FR3，优选Vκ1FR1至FR3，以及框架FR4，所述框架FR4选自VκFR4，特别是Vκ1FR4、Vκ3FR4和VλFR4，特别是包含与选自SEQIDNO：199至SEQIDNO：205中任意之一的氨基酸序列具有至少60、70、80、90％同一性的氨基酸序列的VλFR4，更特别是包含选自SEQIDNO：199至SEQIDNO：205中任意之一的氨基酸序列的VλFR4，优选包含氨基酸序列SEQIDNO：199的VλFR4。


7.根据权利要求4或权利要求5所述的多特异性抗体，其中所述CD137-BD包含分别为SEQIDNO：59、60和61的HCDR1、HCDR2和HCDR3序列，以及分别为SEQIDNO：74、75和76的LCDR1、LCDR2和LCDR3序列；与氨基酸序列SEQIDNO：71至少60、70、80、90、91、9...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·乌雷克，迪·贡德，塞巴斯蒂安·迈耶，马蒂亚斯·布洛克，克里斯蒂安·赫斯，亚历山大·西莫南，斯特凡·沃穆思，
申请(专利权)人：努玛治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH