用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒，该用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，包括用于检测PCDH17基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4‑5所示；用于检测POU4F2基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7‑8所示；用于检测PENK基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.10‑11所示。本发明专利技术的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的试剂盒具有无创便捷、高敏感度以及特异性强的优点。

Primers, probes and kits for early screening and auxiliary diagnosis of bladder cancer

【技术实现步骤摘要】
用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒
本专利技术涉及基因检测技术，特别涉及一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒。
技术介绍
膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。根据2018年中国国家癌症中心公布的数据，膀胱癌位列男性癌症发病第7位。2012-2015年间，膀胱癌5年相对生存率为72.9％。膀胱癌的复发率为60-70％，居所有实体瘤的首位，其中11％的复发患者会发展为浸润性膀胱癌，患者术后通常需每年进行3-4次膀胱镜检查。有效的治疗很大程度上依赖于膀胱癌的早期发现和治疗。FDA已经批准用于临床的尿液诊断膀胱癌检查有脱落细胞学检查、膀胱癌抗原(BTA)分析、核基质蛋白22(NMP22)分析、荧光原位杂交法(Fish)等多种方法。镜检作为临床上诊断膀胱癌的金标准，具有侵入性且价格昂贵的特点，而基于脱落细胞学检查的尿检特异性较低且敏感度差，相对于镜检来说，在早期的低分化的肿瘤敏感度只有4％-31％。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：基于上述现有的技术不足，提供一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒，可提高检测特异性和敏感度。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：提供一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，包括用于检测PCDH17基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.4-5所示；用于检测POU4F2基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.7-8所示；用于检测PENK基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.10-11所示。提供一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的探针，包括用于检测PCDH17基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；用于检测POU4F2基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；用于检测PENK基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示。提供一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的试剂盒，包括反应液，所述反应液包括上述的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物以及上述的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的探针。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术针对PCDH17、POU4F2和PENK三个目的基因设计上述引物和探针，设计的引物探针序列专一性强，性能优于其它靶标基因；可采用多重qMSP技术对疑似膀胱癌病人的尿液样本进行检测以筛查膀胱癌，具有检测灵敏度和特异性高的优点。(2)本专利技术的上述试剂盒不仅可以用于进行早期膀胱癌的辅助诊断，对于确诊的膀胱癌病人可进行肿瘤预后的监测，以减少膀胱癌镜检的频率。(3)可实现完全无创检测，仅需45mL的尿液可完成检测，操作简便，适合临床检测工作的普及与应用。附图说明图1为本专利技术实施例2的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的试剂盒用于三种目标基因检测的ΔCt值的ROC曲线分析图。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。本专利技术最关键的构思在于：针对PCDH17、POU4F2和PENK三个目的基因设计上述引物和探针，并基于尿液沉渣细胞的甲基化特异性荧光定量PCR技术实现膀胱癌早期筛查与辅助诊断。本专利技术提供的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，包括用于检测PCDH17基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.4-5所示；用于检测POU4F2基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.7-8所示；用于检测PENK基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.10-11所示。进一步的，还包括用于检测β-Actin基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。本专利技术提供的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的探针，包括用于检测PCDH17基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；用于检测POU4F2基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；用于检测PENK基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示。进一步的，还包括用于检测β-Actin基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。本专利技术提供的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的试剂盒，包括反应液，所述反应液包括上述的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物以及上述的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的探针。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术针对PCDH17、POU4F2和PENK三个目的基因设计上述引物和探针，设计的引物探针序列专一性强，性能优于其它靶标基因。可采用多重qMSP技术对疑似膀胱癌病人的尿液样本进行检测以筛查膀胱癌，具有检测灵敏度和特异性高的优点。另在检测过程中，以β-Actin基因为内参，添加内参引物和探针，通过对内参的扩增可有效避免假阴性的出现。(2)本专利技术的上述试剂盒不仅可以进行早期膀胱癌的辅助诊断，对于确诊的膀胱癌病人可进行肿瘤预后的监测，以减少膀胱癌镜检的频率。(3)可实现完全无创检测，仅需45mL的尿液可完成检测，操作简便，适合临床检测工作的普及与应用。实施例1本实施例提出一组用于检测膀胱癌的特异性引物和探针，包括β-Actin基因扩增引物和探针、PCDH17基因扩增引物和探针、POU4F2基因扩增引物和探针、PENK基因扩增引物和探针。β-Actin基因扩增引物序列如SEQIDNO.1-2所示；SEQID.1：5’-GGACGTAGGGAGTATATAGGTTG-3’；SEQID.2：5’-CACACAGTAACAAACACAAATTCAC-3’。PCDH17基因扩增引物序列如SEQIDNO.4-5所示；SEQID.4：5’-CGGGTCTTGGAGAATTTCG-3’；SEQID.5：5’-CGCGATCGATACGCTACTTA-3’。POU4F2基因扩增引物序列如SEQIDNO.7-8；SEQID.7：5’-AAGGGTTCTGCGAAGTTG-3’；SEQID.8：5’-AACGCGTAAGGGAAATCA-3’。PENK基因扩增引物序列如SEQIDNO.10-11所示；SEQID.10：5’-GGTTGTTGTTGTTGCGTTTC-3’；SEQID.11：5’-CGACCGAACGCACTAAAC-3’。其中检测探针均为荧光标记，其5’端标记有报告基团，3’端标记有非荧光淬灭基团。本实施例中的检测探针如下：β-Actin检测探针SEQID.3：5’-TexasRed-AAACTTACTAAACCTCCTCCATCACCACCC-BHQ2-3’；PCDH17检测探针SEQID.6：5’-FAM-CCGCTATGTACGTCCACGTCCAACA-BQ1-3’；POU4F2检测探针SEQID.9：5’-VIC-CGTACAAAATCCGAAAACGACGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，其特征在于，包括用于检测PCDH17基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4-5所示；用于检测POU4F2基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示；用于检测PENK基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.10-11所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，其特征在于，包括用于检测PCDH17基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.4-5所示；用于检测POU4F2基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.7-8所示；用于检测PENK基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.10-11所示。


2.根据权利要求1所述的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，其特征在于，还包括用于检测β-Actin基因的引物，其核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。


3.一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的探针，其特征在于，包括用于检测PCDH17基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.6所示；用于检测POU4F2基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；用于检测PENK基因的探针，其核苷酸序列如SEQIDNO.12所示。


4.根据权利要求3所述的用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的探针，其特征在于，还包括用于检测β-Actin基因的探针，其核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂青，周舒君，刘梦豪，薛良，
申请(专利权)人：亚能生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44