一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法，包括以下检测步骤，（1）称取样品；（2）加入硅藻土进行研磨处理；（3）处理后的样品加入提取液混匀；（4）衍生化处理；（5）酸碱调节pH值7.2‑7.5左右；（6）乙酸乙酯萃取，并收集萃取溶液；（7）对萃取液进行40℃氮气吹干，0.1%甲酸水定容过膜上机待测，本发明专利技术中硝基呋喃代谢物的检测方法简单、前处理方便、高效。

A method for the determination of Nitrofuran Metabolite Residues in chicken bone element and chicken bone white Decoction

【技术实现步骤摘要】
一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法
本专利技术涉及一种一种药物残留的检测方法，尤指鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物的前处理检测方法，属于食品安全检测领域。
技术介绍
硝基呋喃类药物是一种人工合成的具有5-硝基结构的广谱类抗菌药，主要包括呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因及硝夫索尔等。它们作用于微生物酶系统，抑制乙酰辅酶A，干扰微生物糖类的代谢，从而起抑菌作用。由于硝基呋喃类药物对人体具有致癌、制畸胎的副作用，中华人民共和国农业部于第235号及560号公告提出，硝基呋喃类药物在饲养过程中禁止使用，在动物性食品中不得检出。但因其价格低、效果好仍在畜禽和水产养殖中使用。硝基呋喃类药物在动物体内具有很差的稳定性，会很快分解产生3-氨基-2唑烷基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)、1-氨基乙内酰脲(AHD)四种主要代谢物。这些代谢物载体内和组织蛋白质结合形成稳定的化合物，在体内残留长达数周之久。在酸性条件下能释放出蛋白，通过衍生化处理增加特征碎片的选择性，提高质谱响应，进而进行质谱确证。骨素是指以动物鲜骨为原料，经过粉碎、提取、分离、真空浓缩、高温杀菌等工艺进行的骨肉精华提取。鸡骨素指以新鲜鸡肉味原料进过一系列上述处理得到的提取物。鸡骨白汤是采用优质新鲜鸡骨为原料，经传统的骨汤水相抽提技术及行业领先的定向酶解技术，将肉骨类蛋白还原为小分子多肽、氨基酸、碳基化合物，再加上特珠的美拉德反应温和生香，进一步增强骨类浓郁香味，最后经纯化、调合、浓缩、微胶囊技术处理等精制而成的天然调味料。它们都是浓缩而成的可以赋予食品特别香气的人工合成调味料。对于这些调味料依靠动物源性食品中硝基呋喃代谢物的提取标准很难达到提取效果，主要原因在于这些调味料基质复杂，含油脂极多，很难达到除油的效果。目前对于硝基呋喃代谢物的提取主要集中在动物源性食品、水产品、鸡蛋、牛奶等，相关标准也比较成熟。除去上述基质，一些鸡骨素、鸡骨白汤等含油量比较大、基质比较复杂的样品中硝基呋喃代谢物的提取依据上述标准并不能达到很好的提取效果，有的甚至因为油脂含量太大而造成乙酸乙酯萃取过程中根本不能分层。基于上述问题，需要提供一种可以解决问题的鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法。本专利技术是通过以下技术方案来实现的：一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法，该方法包括以下步骤：1、称取样品加入硅藻土进行研磨处理；2、处理后的样品加入提取液混匀；3、加入衍生化试剂；4、衍生化处理；5、缓冲溶液调节pH值7.2-7.5左右；6、乙酸乙酯萃取，并收集萃取溶液；7、对萃取液进行40℃氮气吹干，0.1％甲酸水定容过膜上机待测。其中称取样品质量为2.000g，硅藻土的规格为400目，称样量为2.5-3g。其中提取液为0.5mol/L的三氯乙酸溶液。其中衍生试剂为0.1mol/L的2-硝基苯甲醛，衍生条件为避光恒温37℃振荡16h。其中缓冲溶液为NaOH和磷酸氢二钾，浓度分别为2.0mol/L和0.1mol/L。调节pH值7.2-7.5左右。其中乙酸乙酯萃取两次，每次萃取量为5ml。本专利技术的显著优点有：首次提出了鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物的检测方法，目前对于鸡骨素、鸡骨油中硝基呋喃代谢物的检测既没有方法也没有可以判定的依据，参照标准GB/T21311-2007、GB/T20752-2006和农业部781号公告-4-2006的处理方法也达不到好的提取效果，本申请通过样品中加入一定量的硅藻土进行研磨，硅藻土的作用不仅除取一部分油脂而且有助于样品混合均匀，保持样品的稳定性。由于硝基呋喃类药物在体内会和蛋白质结合形成代谢物，在酸性条件下代谢物才会和蛋白质分离，本申请选择三氯乙酸作为提取液，三氯乙酸不仅具有酸性还具有沉淀蛋白的作用。国标方法中衍生试剂用二甲亚砜溶解，本专利技术采用甲醇溶解，可以减少对人体的危害性，衍生试剂的浓度为0.1mol/L，且每个添加量为100ul。本专利技术采用NaOH和磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的磷酸缓冲液更有利于调节溶液pH值。本专利技术采用乙酸乙酯5ml两次萃取较比40ml两次萃取效果基本一致，整个操作过程简单可行，减少了前处理步骤，提高了效率。本专利技术选择0.1％甲酸水进行复溶，由于前述步骤中采用硅藻土除油和三氯乙酸进行除蛋白，因此本步骤中不需要再加入正己烷进行再次除油。本专利技术中实施的鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃类代谢物的检测方法不仅适用于鸡骨素、鸡骨白汤的含油脂较大基质较为复杂的调味料，同时也适用于猪、牛、鸡等动物的肌肉、肝、肾、水产品、鸡蛋、肠衣等食品。本专利技术中硝基呋喃代谢物的检测方法简单、前处理方便、高效。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为鸡骨素的液相色谱质谱图；图2为鸡骨白汤的液相色谱质谱图；图3为标准工作曲线1；图4为标准工作曲线2；图5为标准工作曲线3；图6为标准工作曲线4。具体实施方式本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。本说明书(包括任何附加权利要求、摘要和附图)中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“一端”、“另一端”、“外侧”、“上”、“内侧”、“水平”、“同轴”、“中央”、“端部”、“长度”、“外端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。此外，在本专利技术的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。在本专利技术中，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“套接”、“连接”、“贯穿”、“插接”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本专利技术中的具体含义。如图1、图2、图3、图4、图5和图6所示的一种鸡骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法，其特征在于：包括以下检测步骤，（1）称取样品；（2）加入硅藻土进行研磨处理；（3）处理后的样品加入提取液混匀；（4）衍生化处理；（5）酸碱调节pH值7.2-7.5左右；（6）乙酸乙酯萃取，并收集萃取溶液；（7）对萃取液进行40℃氮气吹干，0.1%甲酸水定容过膜上机待测，上述方法弥补了鸡骨素、鸡骨油中硝基呋喃代谢物检测方法的空白，同时对于含有油脂极多的样品具有很好的参考意义。/n

【技术特征摘要】
1.一种鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法，其特征在于：包括以下检测步骤，（1）称取样品；（2）加入硅藻土进行研磨处理；（3）处理后的样品加入提取液混匀；（4）衍生化处理；（5）酸碱调节pH值7.2-7.5左右；（6）乙酸乙酯萃取，并收集萃取溶液；（7）对萃取液进行40℃氮气吹干，0.1%甲酸水定容过膜上机待测，上述方法弥补了鸡骨素、鸡骨油中硝基呋喃代谢物检测方法的空白，同时对于含有油脂极多的样品具有很好的参考意义。


2.根据权利要求1所述的鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法，其特征在于：步骤（1）中样品称取量为2.000g；硅藻土细度为400目，重量宜根据样品的粘稠度选择，在2.5-3g之间为宜；研磨过程要保证样品混合均匀，研磨至一定细度。


3.根据权利要求1所述的鸡骨素、鸡骨白汤中硝基呋喃代谢物残留的检测方法，其特征在于：步骤（2）中提取液为...

【专利技术属性】
技术研发人员：王成梅，郑文娟，仲光凤，李淑敏，崔浩威，
申请(专利权)人：山东中质华检测试检验有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37