一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，本发明专利技术其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵‑甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：S1、乙酸铵缓冲液的配制，S2、流动相的制备，S3、对照品储备溶液的配制，S4、对照品溶液的配制，S5、供试品溶液的配制，S6、测定，本发明专利技术涉及分析化学技术领域。该依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法,可通过简单的液相色谱测定，准确测定依诺肝素钠中苄索氯铵的残留含量，利用本发明专利技术提供的液相色谱检测方法，可以精确地检测出苄索氯铵的含量，本发明专利技术最低检出水平达到0.001％，在0.005％的残留水平能准确定量。

A method for the determination of benzyl ammonium chloride residue in enoxaparin sodium

【技术实现步骤摘要】
一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法
本专利技术涉及分析化学
，具体为一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法。
技术介绍
依诺肝素钠是用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞的抗凝血剂的一种低分子量肝素，依诺肝素钠为白色或类白色粉末，无味，有引湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。在水溶液中有强负电荷，能与一些阳离子结合成分子络合物，水溶液在pH值7时较稳定，依诺肝素钠是由猪肠豁膜提取的肝素钠经酯化后得到的肝素苄基酯钠衍生物通过碱裂解生成的低分子量肝素钠，它由许多复杂的未定性的低聚糖组成，依诺肝素钠重均分子量在3800-5000之间，分子量<2000的低聚糖质量百分比在12％-20％之间，分子量2000-8000的低聚糖质量百分比在68％-82％，依诺肝素钠为低分子量肝素制剂，可使抗凝血因子Ⅹa与Ⅱa活力的比值大于4，从而发挥很强的抗血栓形成功能和一定的溶血栓作用，推荐剂量下总的凝血指标无明显变化，血小板聚集时间及与纤维蛋白原的结合也无变化，尽管低分子量肝素(LMWH)适用于所有分子量小于8000Da的肝素片段，但每一片段的效应仍取决于分子量，体外将依诺肝素钠(分子量为4000～6000Da)和未分离肝素进行对比的研究显示，根据各自的分子量，与未分离肝素的作用相比较，依诺肝素钠对凝血酶的抑制作用降低约5倍，体内研究也显示皮下应用肝素，激活的部分凝血活酶时间(APTT)显著长于皮下应用依诺肝素钠。苄索氯铵是依诺肝素钠生产过程中使用的辅料，需要对依诺肝素钠成品中苄索氯铵残留加以控制，与其他专利方法比较，目前未见有与本专利技术方法相关的专利方法公开。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，可以通过简单的液相色谱测定，准确测定依诺肝素钠中苄索氯铵的残留含量。(二)技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵-甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：S1、乙酸铵缓冲液的配制：称取乙酸铵77g，精密称定，置1L烧杯中，加冰乙酸60ml溶解，再加水940ml，混匀过滤；S2、流动相的制备：量取300ml步骤S1配制的乙酸铵缓冲液和700ml甲醇，置1L流动相瓶中，混匀，临用前超声脱气10min；S3、对照品储备溶液的配制：称取苄索氯铵对照品9-10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得；S4、对照品溶液的配制：取步骤S3配制的对照品储备溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加乙酸铵缓冲液稀释至刻度，摇匀即得；S5、供试品溶液的配制：称取供试品0.2g，精密称定，置10ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得，平行制备2份；S6、测定：待系统稳定后，分别选取2份进样空白溶液、5份照品储备溶液、2份供试品溶液和1份对照品溶液进行测定，苄索氯铵残留计算公式为优选的，所述步骤S6的苄索氯铵残留计算公式中：W为供试品的称量(g)，C为苄索氯铵对照品的浓度，单位为μg/ml，A供为供试品溶液中苄索氯铵峰面积，A对为前5针对照品溶液中苄索氯铵峰面积的平均值，10为供试品稀释倍数。优选的，使用的所述色谱分析柱型号为RP18.5μm4.6×150mm，柱温为35℃，进样量为20μl，流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，运行时间为20分钟。优选的，使用的所述高效液相色谱仪型号为Ultimate3000。优选的，所述步骤S4配制的对照品溶液中，苄索氯铵峰理论塔板数在3000以上，且对称因子为0.8-1.5，前5针对照品溶液中苄索氯铵峰面积RSD不得过5.0％；6针标准溶液中苄索氯铵峰面积RSD不得过5.0％。(三)有益效果本专利技术提供了一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵-甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：S1、乙酸铵缓冲液的配制：称取乙酸铵77g，精密称定，置1L烧杯中，加冰乙酸60ml溶解，再加水940ml，混匀过滤，S2、流动相的制备：量取300ml步骤S1配制的乙酸铵缓冲液和700ml甲醇，置1L流动相瓶中，混匀，临用前超声脱气10min，S3、对照品储备溶液的配制：称取苄索氯铵对照品约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得，S4、对照品溶液的配制：取步骤S3配制的对照品储备溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加乙酸铵缓冲液稀释至刻度，摇匀即得，S5、供试品溶液的配制：称取供试品0.2g，精密称定，置10ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得，平行制备2份，S6、测定：待系统稳定后，分别选取2份进样空白溶液、5份照品储备溶液、2份供试品溶液和1份对照品溶液进行测定，可通过简单的液相色谱测定，准确测定依诺肝素钠中苄索氯铵的残留含量，利用本专利技术提供的液相色谱检测方法，可以精确地检测出氯化苄的含量，本专利技术最低检出水平达到0.001％，在0.005％的残留水平能准确定量。附图说明图1为本专利技术实施例3空白1噪声图谱；图2为本专利技术实施例3空白2噪声图谱；图3为本专利技术实施例3空白3噪声图谱；图4为本专利技术实施例3空白1图谱；图5为本专利技术实施例3空白2图谱；图6为本专利技术实施例3空白3图谱。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1-6，本专利技术实施例提供四种技术方案：一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，具体包括以下实施例：实施例1检测限与定量限实验：(1)溶液配制a.乙酸铵缓冲液(空白溶液)：称取乙酸铵77g，精密称定，置1L烧杯中，加冰乙酸60ml溶解，再加水940ml，混匀过滤。b.流动相：量取300ml乙酸铵缓冲液和700ml甲醇，置1L流动相瓶中，混匀，临用前超声脱气10min。c.对照品储备溶液：称取苄索氯铵对照品约10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加适量乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得。d.对照品溶液：取对照品储备溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加乙酸铵缓冲液稀释至刻度，摇匀即得。e.定量限溶液：取对照品储备溶液适量，置50ml容量瓶中，用乙酸铵缓冲液稀释至刻度。进样分析，直至峰信噪比在8-12范围内，该溶液浓度即为定量限溶液浓度。f.检测限溶液：取对照品储备溶液适量，置50ml容本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，其特征在于：其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵-甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：/nS1、乙酸铵缓冲液的配制：称取乙酸铵77g，精密称定，置1L烧杯中，加冰乙酸60ml溶解，再加水940ml，混匀过滤；/nS2、流动相的制备：量取300ml步骤S1配制的乙酸铵缓冲液和700ml甲醇，置1L流动相瓶中，混匀，临用前超声脱气10min；/nS3、对照品储备溶液的配制：称取苄索氯铵对照品10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得；/nS4、对照品溶液的配制：取步骤S3配制的对照品储备溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加乙酸铵缓冲液稀释至刻度，摇匀即得；/nS5、供试品溶液的配制：称取供试品0.2g，精密称定，置10ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得，平行制备2份；/nS6、测定：待系统稳定后，分别选取2份进样空白溶液、5份照品储备溶液、2份供试品溶液和1份对照品溶液进行测定，苄索氯铵残留计算公式为

【技术特征摘要】
1.一种依诺肝素钠中苄索氯铵残留的测定方法，其特征在于：其使用高效液相色谱仪、色谱分析柱和乙酸铵-甲醇流动相进行测定，其测定方法具体包括以下步骤：
S1、乙酸铵缓冲液的配制：称取乙酸铵77g，精密称定，置1L烧杯中，加冰乙酸60ml溶解，再加水940ml，混匀过滤；
S2、流动相的制备：量取300ml步骤S1配制的乙酸铵缓冲液和700ml甲醇，置1L流动相瓶中，混匀，临用前超声脱气10min；
S3、对照品储备溶液的配制：称取苄索氯铵对照品10mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得；
S4、对照品溶液的配制：取步骤S3配制的对照品储备溶液1.0ml置50ml容量瓶中，加乙酸铵缓冲液稀释至刻度，摇匀即得；
S5、供试品溶液的配制：称取供试品0.2g，精密称定，置10ml容量瓶中，加相应乙酸铵缓冲液使溶解并稀释至刻度，摇匀即得，平行制备2份；
S6、测定：待系统稳定后，分别选取2份进样空白溶液、5份照品储备溶液、2份供试品溶液和1份对照品溶液进行测定，...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗锡川，何锐，王晶晶，
申请(专利权)人：湖北亿诺瑞生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42