一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法技术

本发明专利技术公开了一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，包括以下步骤：将神经节苷脂粗提取物送入纯净水中进行溶解并过滤，得到神经节苷脂溶液；将过滤后的神经节苷脂溶液上样到装有球形聚酰胺色谱树脂的层析柱中进行层析；采用超纯水和有机溶剂作为流动相对神经节苷脂溶液进行等度洗脱。本发明专利技术所述的一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，发明专利技术选择、搭配合适的层析介质和流动相分离纯化猪神经节苷脂，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量可回收利用，同时本发明专利技术分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本，带来更好的使用前景。

A method for the separation and purification of gangliosides with spherical polyamide resin

【技术实现步骤摘要】
一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法
本专利技术涉及生物医药纯化领域，特别涉及一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法。
技术介绍
神经节苷脂(gangliosides，GLS)是一类酸性鞘糖脂，在神经系统中含量最为丰富。单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)是人类细胞膜的天然成份，安全性高，耐受性良好，临床广泛应用于脑外伤恢复、脑出血恢复、缺氧缺血性脑病、中枢神经系统损伤、神经退行性疾病如帕金森病、阿尔兹海默病、亨廷顿病，以及外周神经病变方面的治疗。结构式如图2所示：随着研究的深入，人们发现神经节苷脂对神经再生有重大促进作用，加拿大金爵集团脑科学研究室首席科学家GatteWalker博士进一步研究发现，神经生长因子(NGF)和神经节苷脂(GM)是脑神经再生发育必需物质，GM介导NGF数十倍增强其活性，形成新的丰富的神经网络，修复并促使脑神经再次发育。GM能够介导神经生长因子NGF促进脑神经细胞再生，表现出良好的生物效应。NGF和GM目前无论在试验中，还是临床实践里都显示出对神经系统促进恢复效果，已成为研究的热点。如这两种药物协同作用能得到充分应用，必将能为中枢神经疾病患者带来更大希望。目前在工业规模的神经节苷脂生产上，主要还是从动物的脑组织中提取，而动物的脑组织主要由脂类、蛋白质和糖类组成。其中脂类包含脂肪、磷酸甘油酯、鞘磷脂、糖脂和胆固醇五大类，脑组织经过提取后的溶液中神经节苷脂含量较低，只有0.2％(wt)，而胆固醇和磷脂的含量很高，占比达90％(wt)以上，另外还有很多复杂的亲水性杂质，如多糖、鞘磷脂和蛋白质等。因此提取纯化神经节苷脂需要多个步骤，导致生产周期长，污染大，收率低，成本高等问题，特别是在最后精制纯化阶段成品纯度不高，杂质清除不彻底，收率低，带来的成本极巨上升和用药安全和影响疗效等重大的技术问题，因此高效高纯低成本分离纯化神经节苷脂是业界关心的关键问题，因此对神经节苷脂的高效高纯低成本分离纯化制备提供各种方案以满足工业化需要甚为必要，为此，我们提出一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，可以有效解决
技术介绍
中的问题。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，包括以下步骤：(1)、将神经节苷脂粗提取物送入纯净水中进行溶解并过滤，得到神经节苷脂溶液；(2)、将过滤后的神经节苷脂溶液上样到装有球形聚酰胺色谱树脂的层析柱中进行层析；(3)、采用超纯水和有机溶剂作为流动相对神经节苷脂溶液进行等度洗脱；(4)、分段收集目的峰值的神经节苷脂溶液，对符合要求的组份液进行汇总。优选的，步骤(2)中，色谱树脂采用球形聚酰胺色谱树脂，所述色谱树脂的型号为HST-PA16。优选的，所述球形聚酰胺色谱树脂粒径为50μm、孔径100A的表面带有酰胺键和烷烃链的色谱填料。优选的，步骤(2)中，上样前，对层析柱进行平衡，先用10％的水相进行除杂再生，后用有机相进行替换平衡，最后用4.5％的水相平衡。优选的，步骤(3)中，有机溶剂采用三氯甲烷和甲醇。优选的，步骤(3)中，洗脱的流程为：用比例为三氯甲烷：甲：水＝70：28：4.5的流动相冲洗，洗脱12个柱体积，结束洗脱主峰过程。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术采用有机溶剂和超纯水作为流动相，用12个柱体积就可完成神经节苷脂主峰的洗脱，因此本过程所用流动相多可回收率用、成本较低，并且使用的流动相量相对较少，纯化周期较短；本专利技术采用单分散的球形聚酰胺色谱树脂作为固定相，仅需一步层析即可使神经节苷脂纯度大于99％，收率大于95.0％；本专利技术方法选择、搭配合适的层析介质和流动相分离纯化猪神经节苷脂，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量可回收利用，同时本专利技术分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。附图说明图1为本专利技术一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法的整体结构流程图；图2为本专利技术一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法中神经节苷脂的结构式；图3为本专利技术一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法中球形聚酰胺色谱树脂的结构图。具体实施方式为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，包括以下步骤：(1)、将神经节苷脂粗提取物送入纯净水中进行溶解并过滤，得到神经节苷脂溶液。(2)、将过滤后的神经节苷脂溶液上样到装有球形聚酰胺色谱树脂的层析柱中进行层析；上样前，对层析柱进行平衡，先用10％的水相进行除杂再生，后用有机相进行替换平衡，最后用4.5％的水相平衡。色谱树脂采用球形聚酰胺色谱树脂，色谱树脂的型号为HST-PA16；球形聚酰胺色谱树脂粒径为50μm、孔径100A的表面带有酰胺键和烷烃链的色谱填料。(3)、采用超纯水和有机溶剂作为流动相对神经节苷脂溶液进行等度洗脱；有机溶剂采用三氯甲烷和甲醇；洗脱的流程为：用比例为三氯甲烷：甲醇：水＝70：28：4.5的流动相冲洗，洗脱12个柱体积，结束洗脱主峰过程。(4)、分段收集目的峰值的神经节苷脂溶液，对符合要求的组份液进行汇总。实施例1取纯度为55.25％的猪神经节苷脂粗提取物，用三氯甲烷：甲醇：水＝70：28：4.5的流动相溶解粗品，溶液中猪神经节苷脂浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。对球形聚酰胺色谱树脂层析柱进行柱前预处理，先用10％的水相进行除杂再生，后用有机相进行替换平衡，最后用4.5％的水相平衡。然后按照三氯甲烷：甲醇：水＝70：28：4.5的流动相进行等度洗脱，流速控制在1CV/h，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。实施例2取纯度为56.65％的猪神经节苷脂粗提取物，用三氯甲烷：甲醇：水＝70：28：4.5的流动相溶解粗品，溶液中猪神经节苷脂浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。对球形聚酰胺色谱树脂层析柱进行柱前预处理，先用10％的水相进行除杂再生，后用有机相进行替换平衡，最后用4.5％的水相平衡。然后按照三氯甲烷：甲醇：水＝70：28：4.5的流动相进行等度洗脱，流速控制在1CV/h，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。实施例3取纯度为53.35％的猪神经节苷脂粗提取物，用三氯甲烷：甲醇：水＝70：28：4.5的流动相溶解粗品，溶液中猪神经节苷脂浓度为10mg/mL。待溶液澄清后，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液待本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)、将神经节苷脂粗提取物送入纯净水中进行溶解并过滤，得到神经节苷脂溶液；/n(2)、将过滤后的神经节苷脂溶液上样到装有球形聚酰胺色谱树脂的层析柱中进行层析；/n(3)、采用超纯水和有机溶剂作为流动相对神经节苷脂溶液进行等度洗脱；/n(4)、分段收集目的峰值的神经节苷脂溶液，对符合要求的组份液进行汇总。/n

【技术特征摘要】
1.一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)、将神经节苷脂粗提取物送入纯净水中进行溶解并过滤，得到神经节苷脂溶液；
(2)、将过滤后的神经节苷脂溶液上样到装有球形聚酰胺色谱树脂的层析柱中进行层析；
(3)、采用超纯水和有机溶剂作为流动相对神经节苷脂溶液进行等度洗脱；
(4)、分段收集目的峰值的神经节苷脂溶液，对符合要求的组份液进行汇总。


2.根据权利要求1所述的一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，其特征在于：步骤(2)中，色谱树脂采用球形聚酰胺色谱树脂，所述色谱树脂的型号为HST-PA16。


3.根据权利要求2所述的一种使用球形聚酰胺色谱树脂分离纯化神经节苷脂的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：厉留柱，宁勇，
申请(专利权)人：海山都上海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31