富含瑞鲍迪苷M的甜菊植物制造技术

本发明专利技术提供一种与野生型甜菊种相比以更高含量含有瑞鲍迪苷M的瑞鲍迪苷M富含型非转基因甜菊植物体。此外，本发明专利技术还提供该瑞鲍迪苷M富含型非转基因甜菊植物体的生产方法、由该植物体而得的干燥叶。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】富含瑞鲍迪苷M的甜菊植物
本专利技术涉及一种瑞鲍迪苷M的含量高的甜菊植物。
技术介绍
为了应对多样化的消费者需求，各种各样的饮料被开发销售。蔗糖等糖类是由于给予甜味等目的而极普通地向饮料中调配的成分，然而因过度摄取对健康造成的影响被指出，对于更低热量且来自于天然的甜味剂的需求逐渐提高。例如专利文献1中公开有含有维生素、高甜度甜味剂及甜味改善组合物的功能性甜味剂组合物。瑞鲍迪苷(Rebaudioside，以下也称“Reb”)作为甜菊萃取物中所含的甜味成分被熟知。甜菊萃取物为从甜菊的叶萃取、提纯而得的物质。甜菊为以南美巴拉圭为产地的菊科多年生植物，学名称作SteviaRebaudianaBertoni。由于甜菊含有具有砂糖的约300倍以上的甜味的成分，因此为了萃取该甜味成分作为天然甜味剂使用而被栽培。作为Reb，报告有RebA、RebB、RebC、RebD、RebE、RebM等各种各样的糖苷的存在(日本特表2012-504552)。在各种各样的Reb中，例如RebA被评价为具有高甜度和优质甜味的甜味剂而被广泛使用。关于其他的Reb，也不断地明确其特有的甜味及附带的味道。在这样的情况下，已知有分别以每干燥叶0.38重量％、3.28重量％而含有瑞鲍迪苷M及D的甜菊植物体(专利文献3)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表2009-517043号说明书专利文献2：日本特表2016-515814号说明书专利文献3：US2016/0057955A1
技术实现思路
瑞鲍迪苷M被认为在甜菊醇糖苷中具有良好的味道，然而却无法从天然的甜菊植物体中多得，其入手成为问题。本专利技术提供一种与野生型甜菊种相比以高含量含有瑞鲍迪苷M的瑞鲍迪苷M富含型非转基因甜菊植物体及该植物体的生产方法及筛选方法。具体而言，本专利技术提供以下内容。[1-1]一种甜菊植物体，为富含瑞鲍迪苷M的非转基因甜菊植物体，其特征在于，相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量含有2％以上的瑞鲍迪苷M。[1-2]根据[1-1]所述的甜菊植物体，其特征在于，相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量进一步含有9.5％以上的瑞鲍迪苷D。[1-3]根据[1-1]或[1-2]所述的甜菊植物体，其特征在于，具有以下的(1)～(5)的至少1种的遗传性状，(1)就与序列号35的44位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，(2)就与序列号37的40位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，(3)就与序列号39的41位相当的位置的碱基为C的等位基因而言为同型接合性，(4)就与序列号42的55～72位相当的部分缺失的等位基因而言为同型接合性，(5)就与序列号43的50位相当的位置的碱基为A的等位基因而言为同型接合性。[1-4]根据[1-1]～[1-3]中任一项所述的甜菊植物体，其特征在于，就选自P01～P05中的至少一种的多态性标记而言为阳性。[1-5]一种植物体的种子、组织、组织培养物或植物培养细胞，其特征在于，为[1-1]～[1-4]中任一项所述的植物体的种子、组织、组织培养物或植物培养细胞。[1-6]根据[1-5]所述的植物体的种子、组织、组织培养物或植物培养细胞，其特征在于，为胚、分裂组织细胞、花粉、叶、根、根尖、花瓣、原生质体、叶的切片及愈伤组织。[1-7]一种生产富含瑞鲍迪苷M的甜菊植物体的方法，其特征在于，包含使[1-1]～[1-4]中任一项所述的甜菊植物体与第2甜菊植物体杂交的工序，所述富含瑞鲍迪苷M的甜菊植物体相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量含有2％以上的瑞鲍迪苷M。[1-8]根据[1-7]所述的方法，其特征在于，第2植物体为[1-1]～[1-4]中任一项所述的甜菊植物体。[1-9]一种萃取物，其特征在于，为[1-1]～[1-4]中任一项所述的甜菊植物体的萃取物或[1-5]所述的植物体的种子、组织、组织培养物或细胞的萃取物。[1-10]一种饮食品、甜味组合物、香料或医药品，其特征在于，含有[1-9]所述的萃取物。[1-11]一种含有瑞鲍迪苷M的萃取物的制造方法，其特征在于，包含由[1-1]～[1-4]中任一项所述的植物体、[1-5]所述的种子、组织、组织培养物或细胞获得萃取物的工序。[1-12]一种瑞鲍迪苷M的制造方法，其特征在于，包含从[1-11]所述的含有瑞鲍迪苷M的萃取物中提纯瑞鲍迪苷M的工序。[1-13]一种饮食品、甜味组合物、香料或医药品的制造方法，其特征在于，包含将根据[1-11]所述的方法而得的萃取物及/或根据[1-12]所述的方法而得的瑞鲍迪苷M与其他成分混合的工序。[1-14]一种筛选方法，为瑞鲍迪苷M富含型甜菊植物体的筛选方法，其特征在于，包含从被实验植物的基因组中检测以下的(1)～(5)的至少1种的遗传性状的存在及/或不存在的工序，(1)就与序列号35的44位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，(2)就与序列号37的40位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，(3)就与序列号39的41位相当的位置的碱基为C的等位基因而言为同型接合性，(4)就与序列号42的55～72位相当的部分缺失的等位基因而言为同型接合性，(5)就与序列号43的50位相当的位置的碱基为A的等位基因而言为同型接合性。[1-15]根据[1-14]所述的筛选方法，其特征在于，包含从被实验植物的基因组中检测选自P01～P05中的至少一种多态性标记的工序。[1-16]根据[1-14]或[1-15]所述的筛选方法，其特征在于，进一步包含测定叶组织的瑞鲍迪苷M的含量的工序。[1-17]一种引物集，为选自下述引物集中的任一种以上的引物集，(1)一种引物集，该引物集包含：具有或含有序列号1中的任意的连续的15碱基以上的序列的正向引物及具有或含有序列号2中的任意的连续的15碱基以上的序列的反向引物，(2)一种引物集，该引物集包含：具有或含有序列号3中的任意的连续的15碱基以上的序列的正向引物及具有或含有序列号4中的任意的连续的15碱基以上的序列的反向引物，(3)一种引物集，该引物集包含：具有或含有序列号5中的任意的连续的15碱基以上的序列的正向引物及具有或含有序列号6中的任意的连续的15碱基以上的序列的反向引物，(4)一种引物集，该引物集包含：具有或含有序列号7中的任意的连续的15碱基以上的序列的正向引物及具有或含有序列号8中的任意的连续的15碱基以上的序列的反向引物，或(5)一种引物集，该引物集包含：具有或含有序列号9中的任意的连续的15碱基以上的序列的正向引物及具有或含有序列号10中的任意的连续的15碱基以上的序列的反向引物，其特征在于，所述任意的连续的15碱基以上的序列位于各引物的3’末端。[1-18]一种试剂盒，为含有[1-17]所述的引物集，以及根据情况含有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富含瑞鲍迪苷M的非转基因甜菊植物体，其特征在于，相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量含有2％以上的瑞鲍迪苷M。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171012 JP 2017-1985151.一种富含瑞鲍迪苷M的非转基因甜菊植物体，其特征在于，相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量含有2％以上的瑞鲍迪苷M。


2.根据权利要求1所述的甜菊植物体，其特征在于，相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量进一步含有9.5％以上的瑞鲍迪苷D。


3.根据权利要求1或2所述的甜菊植物体，其特征在于，具有以下的(1)～(5)的至少1种的遗传性状，
(1)就与序列号35的44位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，
(2)就与序列号37的40位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，
(3)就与序列号39的41位相当的位置的碱基为C的等位基因而言为同型接合性，
(4)就与序列号42的55～72位相当的部分缺失的等位基因而言为同型接合性，
(5)就与序列号43的50位相当的位置的碱基为A的等位基因而言为同型接合性。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的甜菊植物体，其特征在于，就选自P01～P05中的至少一种的多态性标记而言为阳性。


5.权利要求1～4中任一项所述的植物体的种子、组织、组织培养物或植物培养细胞。


6.根据权利要求5所述的种子、组织、组织培养物或植物培养细胞，其特征在于，为胚、分裂组织细胞、花粉、叶、根、根尖、花瓣、原生质体、叶的切片及愈伤组织。


7.一种生产富含瑞鲍迪苷M的甜菊植物体的方法，其特征在于，包含使权利要求1～4中任一项所述的甜菊植物体与第2甜菊植物体杂交的工序，所述富含瑞鲍迪苷M的甜菊植物体相对于叶中所含的总甜菊醇糖苷量含有2％以上的瑞鲍迪苷M。


8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，第2植物体为权利要求1～4中任一项所述的甜菊植物体。


9.权利要求1～4中任一项所述的甜菊植物体的萃取物或权利要求5所述的种子、组织、组织培养物或细胞的萃取物。


10.含有权利要求9所述的萃取物的饮食品、甜味组合物、香料或医药品。


11.一种含有瑞鲍迪苷M的萃取物的制造方法，其特征在于，包含由权利要求1～4中任一项所述的植物体、权利要求5所述的种子、组织、组织培养物或细胞获得萃取物的工序。


12.一种瑞鲍迪苷M的制造方法，其特征在于，包含从权利要求11所述的含有瑞鲍迪苷M的萃取物中提纯瑞鲍迪苷M的工序。


13.一种饮食品、甜味组合物、香料或医药品的制造方法，其特征在于，包含将根据权利要求11所述的方法而得的萃取物及/或根据权利要求12所述的方法而得的瑞鲍迪苷M与其他成分混合的工序。


14.一种瑞鲍迪苷M富含型甜菊植物体的筛选方法，其特征在于，包含从被实验植物的基因组中检测以下的(1)～(5)的至少1种的遗传性状的存在及/或不存在的工序，
(1)就与序列号35的44位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，
(2)就与序列号37的40位相当的位置的碱基为T的等位基因而言为同型接合性，
(3)就与序列号39的41位相当的位置的碱基为C的等位基因而言为同型接合性，
(4)就与序列号42的55～72位相当的部分缺失的等位基因而言为同型接合性，
(5)就与序列号43的50位相当的位置的碱基为...

【专利技术属性】
技术研发人员：岩城一考，宫川克郎，平井正良，兴津奈央子，竹山沙织，
申请(专利权)人：三得利控股株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP