一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法及其应用。它是使用一型甲基化酶，在TOP10菌株体内对外源质粒进行甲基化修饰，得到已甲基化修饰的质粒DNA。采用的方法包括：（1）筛选适合梭菌的培养基；（2）筛选在梭菌中稳定存在的复制子；（3）确定最优的甲基化酶；在所有最优的条件下，可以使已甲基化修饰的质粒DNA转入存在限制修饰系统的食甲基丁酸杆菌，而不会被剪切降解，可以进行后续代谢路径改造。

An optimized culture method of methyl butyrobacter and its application

【技术实现步骤摘要】
一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法及其应用
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法及其应用。
技术介绍
近些年，越来越多的研究发现，梭菌难于或不能被转化的一个重要阻碍因素是存在的限制修饰系统。主要原因是修饰限制系统能将进入细胞内的大部分甚至是全部的外源DNA在没有来得及行使功能就被剪切并降解，也就不能获得转化子或是转化子数量极少。非模式菌株食甲基丁酸杆菌，简称Bm，是一种厌氧芽孢梭菌属，属于单碳厌氧型，可以同时利用多种C1原料进行发酵，如CO2、CO和甲醇等。另外,还能代谢多碳物质,包括葡萄糖、乳糖和丙酮酸，对这些物质代谢的主要产物是醋酸、丁酸或二者皆有,以及相应的醇类。Bm可用于生产石油和化学物质，开发食甲基丁酸杆菌作为甲醇利用的模式宿主，对促进甲醇生物转化具有重要意义。然而当前研究中该菌株遗传操作工具的缺乏，限制了其的发展和应用。目前食甲基丁酸杆菌的研究非常少，对其遗传操作工具的研究就更加的稀少。为了对其进行后续基因改造，因此有必要开发出一种甲基化修饰外源基因的方法，突破这一瓶颈。申请号20本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，选择含有食甲基丁酸杆菌的甘油菌，接种于PB-G培养基中，进行活化和传代；步骤2，选择固体培养基培养食甲基丁酸杆菌；步骤3，选择在食甲基丁酸杆菌中稳定存在的复制子；步骤4，选择甲基化酶，把甲基化修饰后的质粒电转进去得到含修饰的食甲基丁酸杆菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，选择含有食甲基丁酸杆菌的甘油菌，接种于PB-G培养基中，进行活化和传代；步骤2，选择固体培养基培养食甲基丁酸杆菌；步骤3，选择在食甲基丁酸杆菌中稳定存在的复制子；步骤4，选择甲基化酶，把甲基化修饰后的质粒电转进去得到含修饰的食甲基丁酸杆菌。


2.根据权利要求1所述的一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法，其特征在于，所述食甲基丁酸杆菌来源于美国典型菌种保藏中心，编号为ATCC33266，属于现有菌株。


3.根据权利要求1所述的一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法，其特征在于，所述固体培养基为RCM、TYA、YTF、PB-G、NRM或CCM。


4.根据权利要求1所述的一种食甲基丁酸杆菌的优化培养方法，其特征在于，所述复制子包括pIM13，pCB102，pBP1，pC...

【专利技术属性】
技术研发人员：王昕，马琛，王雪麟，陈可泉，马江峰，王静，金雨琪，欧阳平凯，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32