【技术实现步骤摘要】
一种袋鼠、豚鼠与褐家鼠多重PCR检测试剂盒及方法
本专利技术涉及多重PCR技术在肉制品检测领域的应用，更具体地说，是一种袋鼠、豚鼠与褐家鼠DNA快速鉴定试剂盒及检测方法。
技术介绍
人类很早就以鼠肉为食，唐朝时期，岭南獠民喜飨蜜唧，“即鼠胎未瞬，通身赤蠕者”，北宋苏轼在岭南及海南岛也吃过鼠肉，有诗云：“朝盘见蜜唧，夜枕闻鸺鹠。”在中国部分地区存在食用鼠肉现象，多为豚鼠、竹鼠、袋鼠。而褐家鼠是坚决不允许出现在人类餐桌上的。2013年中国江苏出现特大褐家鼠肉假冒羊肉案件，不法商贩为节约成本购入未经检验检疫的褐家鼠肉，利用明胶、胭脂红等添加剂将其伪造成牛、羊肉，以肉卷、肉串、肉丸、火腿肠等形式销售至各地农贸市场。对于鼠肉食用者来说，鼠肉的来源以及安全性十分重要，食用受毒药污染的鼠肉有可能致命。袋鼠是澳大利亚最具特色的肉类食材，食用袋鼠的习俗大约可以追溯到4万年前的澳洲土著。袋鼠肉营养价值高，有丰富的高质量蛋白，低脂肪，低饱和脂肪酸，并含有对心脏有利的多元不饱和脂肪酸(omega-3)，另外袋鼠肉富含铁、锌、维生素B6和维生...
【技术保护点】
1.一种袋鼠、豚鼠与褐家鼠多重PCR检测试剂盒，其特征是，它包含：/n(1)线粒体DNA提取体系/nP1溶液50mL，P2溶液50mL，P3溶液20mL,P4溶液50mL，P5溶液50mL，P6溶液100mL；/n(2)袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉阳性对照品/n紫外灯下切下袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉特异性DNA片段，进行凝胶回收；测定其浓度，转化大肠杆菌后涂板过夜培养；蓝白筛选后转入LB液体培养基于37℃恒温气浴振荡器中培养过夜；质粒小提，测定其DNA浓度。选取浓度超过100ng/μL的样本交由生工生物工程(上海)股份有限公司测序分析。分析测序结果，并将提取的质粒经PCR鉴定后稀...
【技术特征摘要】
1.一种袋鼠、豚鼠与褐家鼠多重PCR检测试剂盒，其特征是，它包含：
(1)线粒体DNA提取体系
P1溶液50mL，P2溶液50mL，P3溶液20mL,P4溶液50mL，P5溶液50mL，P6溶液100mL；
(2)袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉阳性对照品
紫外灯下切下袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉特异性DNA片段，进行凝胶回收；测定其浓度，转化大肠杆菌后涂板过夜培养；蓝白筛选后转入LB液体培养基于37℃恒温气浴振荡器中培养过夜；质粒小提，测定其DNA浓度。选取浓度超过100ng/μL的样本交由生工生物工程(上海)股份有限公司测序分析。分析测序结果，并将提取的质粒经PCR鉴定后稀释一定浓度作为试剂盒的阳性对照品。
(3)多重PCR反应体系
鉴定反应体系(1管)3mL；三重阳性对照反应体系(1管)1mL；灭菌蒸馏水1管，1mL。
(a)鉴定反应体系：总体系为50μL，其中含有反应缓冲液(10×)5μL，dNTP(2.5mmol·L-1)2-5μL，MgCl2(2.5mmol·L-1)3μL，TaqDNA聚合酶1-5μL，袋鼠引物(10μmol·L-1)2.25μL、豚鼠引物(10μmol·L-1)3μL和褐家鼠引物(10μmol·L-1)2μL，待检样本DNA(50ng·L-1)2-6μL，余为双蒸馏水；
(b)阳性对照反应体系：在鉴定反应体系管中吸取44μL，袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉阳性质粒各2μL。
(c)阴性对照液反应体系：在鉴定反应体系管中吸取44μL，灭菌双蒸水6μL。
2.一种袋鼠、豚鼠与褐家鼠多重PCR鉴定方法，其特征是，它包含下述步骤：
(1)袋鼠肉、豚鼠肉与褐家鼠肉三对线粒体DNA特异寡核苷酸引物
在GenBank中下载种属基因序列，再应用NCBIPrimer-BLAST在线引物设计软件设计，具体引物序列如下：
引物1(袋鼠Macropus，GenBank:EF368023.1，扩增长度186bp)
Forwardprimer：5′AACCGTCATAGCAACAG3′
Reverseprimer：5′AAGTGGAAGGCGAAA3′
引物2...
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