一种小型实验鱼血液采集的方法技术

本发明专利技术公开了一种小型实验鱼血液采集方法的建立，本发明专利技术通过前期血管染色等实验确定了虾虎鱼的最佳取血位置，并制备出适合小型实验鱼快速采血的合适范围的毛细吸管，可有效防止溶血现象和细菌污染。同时，本发明专利技术提供了一种特别适合小型海水鱼血液采集的溶液配方，有效阻止血小板聚集和血栓形成，起着抗凝血作用，很好的抑制血糖降解，保证糖耐量实验的准确性。本发明专利技术能在保证模型鱼存活的前提下，采用糖耐量实验和生长、血液指标的结合的方法用于胰腺脂肪浸润模型阳性率的评估，具有实际意义。

A method of blood collection for small experimental fish

【技术实现步骤摘要】
一种小型实验鱼血液采集的方法
本专利技术公开了一种小型海水实验鱼血液采集的方法。本专利技术涉及动物实验和生物
，且涉及一种适用于小型实验鱼的采血改进装置。
技术介绍
近年来斑马鱼(Daniorerio)、青鳉(Oryziaslatipe)等小型实验鱼在遗传学、环境毒理学、药理学、分子发育生物学、免疫学研究等方面发挥着越来越重要的作用。诸氏鲻虾虎鱼(Mugilogobiuschulae)是目前国内唯一具有自主知识产权的标准化海水实验鱼类，为生物毒性实验推荐受试生物。研究学者长期致力于诸氏鲻虾虎鱼的标准化研究，至今2个品系已近交至第13代、封闭群培育至子19代，并对其遗传、病原、营养及环境展开系统研究。利用上述小型实验鱼开展免疫、脂代谢等研究时，常常涉及到血液指标的测定。由于小型实验鱼个体普遍较小(<4cm)，血液量非常少(<15μL)，利用普通的解剖器械和常规的采血方法不可避免会发生溶血现象。此外，由于实验动物是“活的精密仪器”，其区别于其他动物最显著的特征是实验动物实施标准化的质量控制，而鱼类血细胞的采集和研究对于实验鱼病原检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小型实验鱼血液采集的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)收集受精后出膜的虾虎鱼幼鱼；/n2)依次使用不同浓度的甲醇溶液脱水、孵育；/n3)依次使用不同浓度的甲醇溶液水化、孵育；/n4)将NBT和BCIP混合后，避光孵育，终止反应；/n5)脱色，确定取血位置采血；所述取血位置为实验鱼局部体节动脉回流和静脉回流的交汇处。/n

【技术特征摘要】
1.一种小型实验鱼血液采集的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)收集受精后出膜的虾虎鱼幼鱼；
2)依次使用不同浓度的甲醇溶液脱水、孵育；
3)依次使用不同浓度的甲醇溶液水化、孵育；
4)将NBT和BCIP混合后，避光孵育，终止反应；
5)脱色，确定取血位置采血；所述取血位置为实验鱼局部体节动脉回流和静脉回流的交汇处。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述虾虎鱼幼鱼为受精后出膜的96h–7d的虾虎鱼幼鱼。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述梯度浓度的甲醇溶液分别为25％、50％、75％和100％的甲醇溶液；所述孵育时间为5～20min。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述梯度浓度的甲醇溶液为NTMT稀释的100％、75％、50％和25％的甲醇；所述孵育时间为5～20min。


5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤5)采血采用毛细吸管，所述毛细吸管的制备方法：
1)磨针仪打磨、抛光拉取的玻璃毛细管；
2)将10ul移液枪枪头，加热毛细管的吸取样品端，并套取打磨、抛光后的玻璃毛细管；
3)将步骤2)带有玻璃毛细管的枪头套上移液枪。


6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，还包括将血液进行血浆分离，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏远征，李建军，蔡磊，黄韧，
申请(专利权)人：广东省实验动物监测所，
类型：发明
国别省市：广东;44