【技术实现步骤摘要】
用于红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒及其应用
本专利技术属于免疫检测
，具体涉及用于红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒及其应用。
技术介绍
红斑狼疮（Lupuserythematosus,LE）是一种多因素参与，严重影响生活质量和危害健康的慢性自身免疫性疾病。80%以上的患者可在发病初始或者进展中出现皮肤受累。LE为一病谱性疾病，一端为皮肤型红斑狼疮（cutaneouslupuserythematosus,CLE）,呈慢性良性经过，病变主要局限于皮肤；另一端为系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE），多急性发病，病变可累及多系统，严重者可危及生命。临床上，医生根据红斑狼疮皮损表现和相应组织病理改变，将LE分为急性皮肤型红斑狼疮（acutecutaneouslupuserythematosus,ACLE），亚急性皮肤型红斑狼疮（subacutecutaneouslupuserythematosus,SCLE）和盘状红斑狼疮（discoidlupusery...
【技术保护点】
1.一种用于红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒，其特征在于，包括利用原位标记免疫染色检测CD4、CD8、CD19、CD11b阳性免疫细胞所需的试剂，所需的试剂包括：抗原修复液、非特异性阻断剂、血清封闭剂、抗体稀释剂、单克隆抗体、洗涤剂、辣根过氧化物酶标记的二抗、酪胺荧光染色剂、核染色剂。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于红斑狼疮分型的皮肤组织免疫细胞原位检测试剂盒，其特征在于，包括利用原位标记免疫染色检测CD4、CD8、CD19、CD11b阳性免疫细胞所需的试剂，所需的试剂包括：抗原修复液、非特异性阻断剂、血清封闭剂、抗体稀释剂、单克隆抗体、洗涤剂、辣根过氧化物酶标记的二抗、酪胺荧光染色剂、核染色剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原修复液包括pH6.0的酸性抗原修复液和/或pH8.0的碱性修复液；所述非特异性阻断剂为单独的0.5%高碘酸溶液或者联合使用的0.5%高碘酸溶液和3%H2O2溶液。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体包括：兔源CD4单克隆抗体、鼠源CD8单克隆抗体、兔源CD19单克隆抗体、兔源CD11b单克隆抗体；CD11b单克隆抗体匹配Opal570染液；CD8单克隆抗体匹配Opal650染液；CD4单克隆抗体匹配Opal520染液；CD19单克隆抗体匹配Opal690染液。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，检测CD4、CD8、CD19、CD11b四种细胞时，每种单克隆抗体染色步骤如下：
a)第一轮染色抗体：CD11b单克隆抗体；其抗原修复条件：酸性抗原修复液高压修复或酸性抗原修复液微波修复；其稀释比范围：1:1000-1:2000，依次经过一抗和二抗敷育，然后采用染色剂敷育；
b)第二轮染色抗体：CD8单克隆抗体；其抗原修复条件：碱性抗原修复液高压修复或碱性抗原修复液微波修复；其稀释比范围：1:2-1:5，依次经过一抗和二抗敷育，然后采用染色剂敷育；
c)第三轮染色抗体：CD4单克隆抗体；其抗原修复条件：碱性抗原修复液高压修复或碱性抗原修复液微波修复；其稀释比范围：1:2-1:5，依次经过一抗和二抗敷育，然后采用染色剂敷育；
d)第四轮染色抗体：CD19单克隆抗体；其抗原修复条件：碱性抗原修复液高压修复或碱性抗原修复液微波修复；其稀释比范围：1:200-1:500，依次经过一抗和二抗敷育，然后采用染色剂敷育；
室温范围：20-27℃；
核复染是对全体细胞的检测：取酸性抗原修复液微波修复，采用DAPI进行染色。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，单克隆抗体在抗原修复后，一抗敷育之前，进行非特异性阻断剂阻断，完成阻断后洗涤剂洗涤，再采用血清封闭剂室温封闭15-50min。
6.权利要求1-5任一项所述的试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆前进，吴海竞，李倩文，陈凯丽，赵明，胡凯，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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