一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法，属于免疫诊断技术领域。该试剂盒包括：含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。本发明专利技术还提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒的制备方法。采用本方法制备的试剂盒具有较高的检测灵敏度，操作简单、定量检测准确、快速，采用顺磁性的微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度。

A kit for IgM antibody detection of Toxoplasma gondii and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于化学发光体外诊断
，涉及一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
弓形虫病是一种由细胞内的原虫寄生虫(称为刚地弓形虫)所引起的广泛传播的感染性疾病。此种疾病可感染人类及其它温血动物。弓形虫感染主要是摄入被猫粪的成熟包囊污染的食物或水或摄入含有组织包囊的生肉引起的获得性感染，健康个体中原发性急性感染大多症状轻微甚至无症状，常有长期持续的潜伏感染。但是，免疫抑制者(如器官移植、AIDS患者等)潜伏弓形虫感染的复发常诱发脑膜脑炎，弓形虫脑炎已经证实是获得性免疫缺陷综合症患者的重要死因之一。由于弓形虫可通过胎盘传播给胎儿，因此怀孕期间原发性母体弓形虫感染可能导致胎儿严重损害，大多数先天性感染婴儿在出生时没有临床症状，但后来可能发展呈严重的后遗症，如智障和精神运动性阻抑、脉络视网膜炎、大脑钙化以及听力丧失等。随着怀孕年龄增加胎儿感染率增加。但有严重临床表现着在早期母体感染病例中较高。对妊娠期间的急性感染进行早期药物治疗可以组止先天损害并改变临床表现的严重程度。弓形虫病感染通常通过检测抗弓形虫特异性IgG和IgM抗体进行诊断。弓形虫IgG抗体检测用于评价弓形虫血清学状态，反映急性或潜伏感染。弓形虫IgM抗体检测反映急性、新近或复发弓形虫感染。目前常用的检测弓形虫IgM抗体的方法有放射免疫分析法、酶联免疫分析技术等，但以上方法存在诸多不足，如放射免疫分析法存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点；ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒检测方法灵敏，准确度高，重复性好。本专利技术的首先提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，该试剂盒包括：含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。优选的是，所述的含有链酶亲和素磁微粒的悬液中，链酶亲和素磁微粒的粒径为1～3μm。优选的是，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液中，生物素与抗体标记的摩尔比例为(1～10)：1。优选的是，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液中，化学发光标记物与抗原标记的摩尔比例为(1～10)：1。优选的是，化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物。优选的是，该试剂盒中还包括化学发光预激发液A液和B液；所述A液为过氧化氢和硝酸溶液；所述B液为氢氧化钠溶液。优选的是，该试剂盒中还包括清洗液；所述清洗液为磷酸缓冲液。本专利技术还提供了上述一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂，得到含有链酶亲和素磁微粒的悬液；步骤二：取Toxo抗原，用缓冲液稀释，加入化学发光标记物进行标记，标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭后用离心管进行超滤离心，将化学发光标记物标记的Toxo抗原重悬于缓冲液中保存；步骤三：取抗人IgM单克隆抗体，用缓冲液稀释，加入生物素进行标记，标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭后用离心管进行超滤离心，将生物素标记的抗人IgM单克隆抗体重悬于缓冲液中保存。本专利技术的有益效果1、本专利技术采用吖啶酯直接发光，降低了本底空白，提高了灵敏度。采用顺磁微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度。2、本专利技术使用生物素-亲和素体系，有效避免了抗体直接包被磁珠导致的磁珠凝集现象，解决了试剂稳定性的问题。而生物素-亲和素体系是通过链酶亲和素-生物素之间的特殊作用，将生物素标记的抗人IgM单克隆抗体连接到磁微粒上，同时吖啶酯标记的Toxo抗原、生物素标记的抗人IgM单克隆抗体与样本中的ToxoIgM抗体发生免疫反应，形成抗原抗体复合物，并通过生物素与链酶亲和素之间的反应结合到磁颗粒上。3、本检测试剂盒为化学发光免疫分析法，该方法具有种操作简单，无放射性风险及其检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测；另一方面，弓形虫IgM化学发光免疫测试剂盒与化学发光免疫检测仪器组成封闭系统，降低了人为操作的误差，提高了整个系统的灵敏度与准确度。4、本专利技术适用于体外检测血清、血浆中弓形虫(Toxo)IgM抗体的含量。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中描述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。本专利技术的首先提供一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，该试剂盒包括：含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。按照本专利技术，所述的含有链酶亲和素磁微粒的悬液浓度优选0.03％～0.1％，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液的浓度优选0.1～2μg/mL，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液的浓度优选0.5～2μg/mL。按照本专利技术，所述的含有链酶亲和素磁微粒的悬液中，链酶亲和素磁微粒的粒径优选为1～3μm。按照本专利技术，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体中，生物素与抗体标记的摩尔比例为(1～10)：1。按照本专利技术，化学发光标记物标记的Toxo抗原中，化学发光标记物与抗原标记的摩尔比例为(1～10)：1。化学发光标记物优选为吖啶酯或吖啶酯衍生物。按照本专利技术，所述的试剂盒中还包括化学发光预激发液A液和B液；所述A液为过氧化氢和硝酸溶液；所述B液为氢氧化钠溶液。按照本专利技术，所述的试剂盒中还包括清洗液；所述清洗液为磷酸缓冲液。本专利技术还提供了上述一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：1、含有链酶亲和素磁微粒的悬液的制备将链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂，得到链霉亲和素磁颗粒悬浮液；所述的链霉亲和素磁颗粒溶液的浓度优选为50～100mg/mL；链霉亲和素磁颗粒溶液和TBST溶液的体积比优选为(0.5～1)：(5～10)；所述的混匀时间优选为10～15min，所述的缓冲液为50mmol/LMES、0.05％吐温-20、0.05％Proclin300，pH6.5；所述的固相试剂链霉亲和素磁颗粒悬浮液的浓度优选为0.01％～1％；所述的链霉亲和素磁颗粒溶液的来源为商购，选自安捷伦科技有限公司公司，货号PL6727-1001。2、化学发光物质标记的Toxo抗原的制备：取Toxo抗原，用30KDa超滤离心管进行超滤离心，将原材料缓冲液置换为标记缓本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：/n含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。/n

【技术特征摘要】
1.一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：
含有链酶亲和素磁微粒的悬液，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液。


2.根据权利要求1所述的一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的含有链酶亲和素磁微粒的悬液中，链酶亲和素磁微粒的粒径为1～3μm。


3.根据权利要求1所述的一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，生物素标记的抗人IgM单克隆抗体悬液中，生物素与抗体标记的摩尔比例为(1～10)：1。


4.根据权利要求1所述的一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，化学发光标记物标记的Toxo抗原悬液中，化学发光标记物与抗原标记的摩尔比例为(1～10)：1。


5.根据权利要求1所述的一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物。


6.根据权利要求1所述的一种弓形虫IgM抗体检测试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟涛，高智玲，李冬梅，高威，孙成艳，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22