对含有poly(A)的RNA测定的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物信息领域，具体涉及一种对含有poly(A)的RNA测定的方法及试剂盒。该方法包括在所述含有poly(A)的RNA的3’末端，连接3’接头，以便获得含有3’接头的RNA；以所述含有3’接头的RNA为模板进行反转录，在所述含有3’接头的RNA的5’末端连接5’接头，以便获得含有3’接头和5’接头的RNA；基于所述含有3’接头和5’接头的RNA，构建测序文库，以便对所述含有poly(A)的RNA进行测定。利用本发明专利技术的方法可以不经过打断，即可获得全长RNA以及poly(A)的信息；且操作步骤简单方便。

Method and kit for the determination of RNA containing poly (a)

【技术实现步骤摘要】
对含有poly(A)的RNA测定的方法及试剂盒
本专利技术涉及生物信息领域，具体涉及一种对含有poly(A)的RNA测定的方法及试剂盒，尤其涉及一种对含有poly(A)的mRNA中poly(A)的长度以及mRNA全长序列进行测定的方法。
技术介绍
大多数真核生物的mRNA3’末端都有由100-200个腺苷酸A组成的poly(A)尾巴。它是由poly(A)聚合酶催化聚合到转录后的mRNA前体3’末端。由一个特异性酶识别切点上游方向13～20碱基的加尾识别信号AAUAAA以及切点下游的保守序列GUGUGUG，把切点下游的一段切除，然后再由Poly(A)催化，加上poly(A)尾巴。Poly-ATail保护mRNA，免受核酸外切酶攻击，并且对转录终结、将mRNA从细胞核输出及进行翻译、microRNA的作用都十分重要。2014年以前，测量poly(A)尾巴长度的方法，主要是northernblot和RT-PCR/Sanger技术。由于技术的限制，只局限于研究几个基因的poly(A)尾巴长度的作用。2014年随着二代高通量测序技术的发展，几个研本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对含有poly(A)的RNA测定的方法，其特征在于，包括：/n在所述含有poly(A)的RNA的3’末端，连接3’接头，以便获得含有3’接头的RNA；/n以所述含有3’接头的RNA为模板进行反转录处理，在所述含有3’接头的RNA的5’末端连接5’接头，以便获得含有3’接头和5’接头的RNA；/n基于所述含有3’接头和5’接头的RNA，构建测序文库，以便对所述含有poly(A)的RNA进行测定。/n

【技术特征摘要】
1.一种对含有poly(A)的RNA测定的方法，其特征在于，包括：
在所述含有poly(A)的RNA的3’末端，连接3’接头，以便获得含有3’接头的RNA；
以所述含有3’接头的RNA为模板进行反转录处理，在所述含有3’接头的RNA的5’末端连接5’接头，以便获得含有3’接头和5’接头的RNA；
基于所述含有3’接头和5’接头的RNA，构建测序文库，以便对所述含有poly(A)的RNA进行测定。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有poly(A)的RNA为含有poly
(A)的mRNA；
任选地，所述3’接头为3’DNA接头；
任选地，所述3’接头的序列为SEQIDNO:1；
任选地，所述5’接头为5’DNA接头，所述5’DNA接头为5’模板转换接头；
任选地，所述5’模板转换接头的序列为SEQIDNO:2。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，利用反转录酶对所述含有3’接头的RNA进行反转录处理；
任选地，所述反转录酶选自superscriptII酶、Smartscribe反转录酶中的至少一种；
任选地，在进行所述反转录处理时，所用到的反转录引物为SEQIDNO:3。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括：
基于所述含有3’接头和5’接头的RNA，构建测序文库，以便测序确定所述含有poly
(A)的RNA中RNA的全长序列和poly(A)的长度。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括：
基于所述含有poly(A)的RNA中poly(A)的长度，将所述含有poly(A)的RNA序列比对到参考基因组上，以便确定待测样品的可变剪接的poly(A)...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐冲，郭梅，石卓兴，陈智超，杨林峰，高强，
申请(专利权)人：深圳华大基因科技服务有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44