【技术实现步骤摘要】
打靶载体及白喉毒素调控清除单核细胞衍生树突状细胞的转基因小鼠的构建方法和应用
本专利技术涉及动物模型构建领域，更具体地，涉及一种打靶载体及白喉毒素调控清除单核细胞衍生树突状细胞的转基因小鼠的构建方法和应用。
技术介绍
树突状细胞(dendriticcells，MDC)是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞，是唯一能激活未致敏的初始T细胞的抗原体提呈细胞，是启动、调控、并维持免疫应答中心。树突状细胞起源于骨髓中的造血干细胞，一方面髓样干细胞可以分化为髓样DC，又称DC1，包括朗格汉斯细胞，间质DC以及单核细胞衍生DC；另一方面，淋巴样干细胞可以分化为淋巴样DC，又称DC2。当外周血中的单核细胞可以在GM-CSF和IL-4的刺激下分化为DC，组织中处于稳态的DC能自我更新，而不需要单核细胞衍生DC的补充。在外周血和骨髓中，单核细胞的数量大约是DC的20倍，并且单核细胞衍生DC作为DC的一个主要部分，其功能是不能被忽视的。为了研究单核细胞衍生DC的功能，一个重要的实验就是在体内清除单核细胞衍生DC，然而现在未有能够特异性...
【技术保护点】
1.一种带小鼠DC-SIGN长同源臂的整合外源基因IRES-DTR的打靶载体，其特征在于，所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.8所示，命名为pL253-DCSIGN 5HA L-IRES-DTR-PEN-DCSIGN 3HA L-MCL-HSV TK。/n
【技术特征摘要】
1.一种带小鼠DC-SIGN长同源臂的整合外源基因IRES-DTR的打靶载体，其特征在于，所述靶向打靶载体序列如SEQIDNO.8所示，命名为pL253-DCSIGN5HAL-IRES-DTR-PEN-DCSIGN3HAL-MCL-HSVTK。
2.一种用于构建如权利要求1所述打靶载体的提取载体，其特征在于：所述提取载体序列如SEQIDNO.7所示，命名为载体pL253-retrieval5HA-retrieval3HA-MCL-HSVTK。
3.一种提取载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)以RP23-12K14BACDNA为模板，利用序列如SEQIDNO.1所示的正向引物和序列如SEQIDNO.2所示的反向引物进行PCR，扩增出序列如SEQIDNO.3所示的基因片段DC-SIGN5’侧同源臂；以RP23-12K14BACDNA为模板，利用序列如SEQIDNO.4所示的正向引物和序列如SEQIDNO.5所示的反向引物进行PCR，扩增出序列如SEQIDNO.6所示的基因片段DC-SIGN3’侧同源臂；
(2)将retrieval5HA和retrieval3HA利用酶切位点NotI、SpeI、BamHI克隆至带阴性选择标记HSVTK的载体pL253-retrivied-empty，得到序列如SEQIDNO.7所示的提取载体pL253-retrieval5HA-retrieval3HA-MCL-HSVTK。
4.一种打靶载体的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
(1)电穿孔法将质粒pRED/ET转化入BACCloneDCSIGN-IRES-DTR-PEN，并用L-阿拉伯糖诱导Red/ET表达；
(2)电穿孔法将利用SpeI酶切线性化的pL253-retrieval5HA-retrieval3HA-MCL-HSVTK提取载体转化入上述表达RED/ET的BACCloneDCSIGN-IRES-DTR-PEN，同源重组得到序列如SEQIDNO.8所示的带有DC-SIGN5’同源臂(～2kb)和3’同源臂(～20kb)的打靶载体，命名为打靶载体pL253-DCSIGN5HAL-IRES-DTR-PEN-DCSIGN3H...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛剑鹏，梁廷波，白雪莉，汤江辉，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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