一种以真菌操纵子为基础的外源基因定点定量定时表达系统技术方案

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种以真菌操纵子为基础的外源基因定点定量定时表达系统，其包括顺序连接的序列：含终止密码子的宿主靶基因终止密码子上游片段、真菌操纵子基因间隔区、目标基因、宿主靶基因终止密码子下游片段的DNA片段，利用真菌操纵子基因间隔区序列连接目标基因，通过定点基因插入的方式将其插入到宿主细胞表达基因终止密码子的下游，利用靶基因的启动子完成目标基因的转录表达。该表达系统简化了实验操作步骤，提高了工作效率，增加了目标基因表达的可控性和稳定性，降低了多基因异源表达对已知启动子多样性的要求，对于利用合成生物学进行天然产物的挖掘、产量的提高以及非天然化合物的创造等方面具有较高的实际应用价值。

A fixed-point quantitative and timing expression system of foreign genes based on fungal operon

【技术实现步骤摘要】
一种以真菌操纵子为基础的外源基因定点定量定时表达系统
本专利技术属于生物
，涉及一种以真菌操纵子为基础的外源基因定点定量定时表达系统。
技术介绍
天然产物是现代药物创制的重要来源。然而，目前利用传统的筛选技术获得具有实用价值的新结构天然产物的难度越来越大，另外还有一部分已知的活性天然产物来源稀缺、天然含量低、组份复杂且难以完全分离。基因组测序技术的发展和天然产物合成途径的解析，为通过异源生物合成技术生产这些有价值的天然产物提供了可能。合成生物学技术以其“跨物种”转移功能元件以及模块的能力，逐渐成为解决这些问题的主要手段。目前，在基因组测序的基础上，利用合成生物学的方法已完成青蒿素前体青蒿酸、阿片类药物等重要活性天然产物在细胞工厂中的生产。酿酒酵母、构巢曲霉等真菌底盘细胞的遗传背景清楚，遗传操作相对于其它真核生物更为简单。与大肠杆菌、放线菌等原核生物类底盘细胞相比，来源于真核生物的生物合成酶在真菌中更容易成功表达并发挥其催化作用。在真菌中，基因是受独立调控并转录成单顺反子mRNA的，因此外源基因在其中的表达也需要以启动子-基因-终止本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种操纵子基因间隔区，其序列是5’-GAGTCAATCAAACACTC- 3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种操纵子基因间隔区，其序列是5’-GAGTCAATCAAACACTC-3’。


2.一种以真菌操纵子为基础的外源基因定点定量定时表达系统，其包括顺序连接的序列：
含终止密码子的宿主靶基因终止密码子上游片段、真菌操纵子基因间隔区、目标基因、宿主靶基因终止密码子下游片段的DNA片段，
其中所述真菌操纵子基因间隔区具有下述序列：
5’-CAATCAAAC-3’，或其5’端增加1至8个核苷酸，3’端增加1至9个核苷酸，其中增加核苷酸与5’-TGTTGAGTCAATCAAACACTCAACAG-3’相对应，优选的是5’-TGTTGAGTCAATCAAACACTCAACAG-3’、5’-GAGTCAATCAAACACTC-3’。


3.如权利要求2所述表达系统，其特征在于，在目标基因、宿主靶基因终止密码子下游片段的DNA片段之间还连接有筛选标记基因。


4.如权利要求2所述表达系统，其特征在于，所述目标基因是一个或多个，优选为2、3、4个。

【专利技术属性】
技术研发人员：徐玉泉，岳群，张礼文，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11