一种通过生物成膜连续化发酵生产赖氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种通过生物成膜连续化发酵生产赖氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法，所述的重组谷氨酸棒杆菌是通过在谷氨酸棒杆菌中过表达蛋白酶基因FtsH构建得到的；所述的构建方法包括如下步骤：(1)对谷氨酸棒杆菌的基因组进行PCR，扩增FtsH基因，得到扩增的FtsH基因片段；(2)将FtsH基因片段克隆到过表达质粒上，得到重组质粒；(3)将重组质粒导入谷氨酸棒杆菌中，筛选得到过重组谷氨酸棒杆菌。有益效果：本发明专利技术构建了一株过表达蛋白酶FtsH的谷氨酸棒杆菌，加强了谷氨酸棒杆菌的成膜能力，使得谷氨酸棒杆菌固定化连续发酵的产量比游离发酵的原始菌提高了38.2％，且发酵周期缩短了26.4％。

A recombinant Corynebacterium glutamate and its construction method for lysine production by continuous biofilm fermentation

【技术实现步骤摘要】
一种通过生物成膜连续化发酵生产赖氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法
本专利技术属于微生物及发酵工程
，具体涉及到一种通过生物成膜连续化发酵生产赖氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及其构建方法。
技术介绍
L～赖氨酸属于天冬氨酸家族氨基酸，为人类和动物所必需的自身不能合成的氨基酸之一，被广泛用于饲料添加剂、食品强化剂和医药产品等方面，其中90％以上的赖氨酸产品用作饲料添加剂。生物膜广泛存在于自然界，在生物膜形成过程中，细菌自身分泌产生的的胞外聚合物(EPS)是生物膜形成的物质基础，具有分层分布的特点，对细菌的粘附及聚集特性起到了关键作用。固定化连续发酵技术现如今已经投入到生产当中，其中用生物膜的方式进行固定化连续发酵已初见成效。然而，在谷氨酸棒杆菌中，基于生物膜的方式经行固定化连续发酵却鲜有报道。谷氨酸棒杆菌作为重要的工业菌株，其成膜能力非常弱，难以连续化发酵，因此我们需要对该菌株进行分子改造，使其成膜效果增强，以实现后期固定化连续发酵。连续连续在谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述的重组谷氨酸棒杆菌是通过在谷氨酸棒杆菌中过表达蛋白酶基因FtsH构建得到的。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述的重组谷氨酸棒杆菌是通过在谷氨酸棒杆菌中过表达蛋白酶基因FtsH构建得到的。


2.根据权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述蛋白酶基因FtsH的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求1所述的重组谷氨酸棒杆菌，其特征在于，所述谷氨酸棒杆菌为ATCC13032。


4.权利要求1～3中任意一项所述的重组谷氨酸棒杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)对谷氨酸棒杆菌ATCC13032的基因组进行PCR，扩增FtsH基因，得到扩增的FtsH基因片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
(2)将步骤(1)得到的FtsH基因片段克隆到过表达质粒上，得到重组质粒；
(3)将步骤(2)得到的重组质粒导入谷氨酸棒杆菌中，筛选得到过重组谷氨酸棒杆菌；
步骤(1)中，扩增FtsH基因设计的引物的序列如下：引物1的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；引物2的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。


5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增的方法为：94℃变性30秒，55℃退火30秒，72℃延伸2分钟，进行30个循环。


6.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的过表达质粒为pXMJ19。


7.权利要求1中所述的重组谷氨酸棒杆菌在产赖氨酸中的应用。


8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
(i)将重组谷氨酸棒杆菌接种到种子培养基中，培养，得到种子液；
(ii)将预处理后的固定化载体置于发酵培养基中...

【专利技术属性】
技术研发人员：应汉杰，柳东，雷鸣，张迪，杨雨晗，吴诗诗，陈勇，刘庆国，牛欢青，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32