基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了免标记的荧光探针及其制备方法和应用，所述免标记的荧光探针的制备方法如下：将金纳米粒子与ssDNA溶液混合后涡旋5~10秒得到混合溶液，在混合溶液加入柠檬酸缓冲溶液，3~5分钟后加入HEPES缓冲溶液，离心洗去多余ssDNA即得。本发明专利技术还公开了基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性检测方法及其在细胞成像中的应用。本发明专利技术不需要借助昂贵精密仪器检测，简化了检测方法，极大地降低了检测FEN 1酶的检测成本，本发明专利技术具有运行成本低、检测快速简便、选择性好、灵敏度高等优点。此外，所制备的荧光探针具有较好的生物相容性和低毒性特点，可以进入细胞，进行体内检测。

Detection method and application of Fen1 enzyme activity based on the construction of fluorescent probe without labeling

【技术实现步骤摘要】
基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性检测方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性的检测方法及其应用。
技术介绍
瓣状核酸内切酶(FEN1)是一种金属依赖性核酸酶，它只识别特定的结构而不依赖于序列，主要切除双链DNA中悬挂的5’-端序列。在生物体内参与DNA复制和损伤修复过程，主要涉及冈崎片段成熟和长片段碱基切除修复。然而，过表达的FEN1酶会促进肿瘤细胞的增值、分化。研究表明，相比于正常组织，肿瘤组织内的FEN1酶含量更高，而且，过表达的FEN1酶与肿瘤的大小、分化程度以及TNM分期有关。因此，FEN1酶可以作为一种新型的肿瘤标志物，通过检测生物体内FEN1酶的含量来预判肿瘤的发生、发展。在过去的几十年里，FEN1酶曾作为辅助酶广泛应用于生物传感器的构建，主要起到信号循环放大的作用。但是，把FEN1酶作为检测对象的研究却不是很多，尤其是定量分析检测。尽管困难重重，我们还是构建出一种免标记的荧光探针对FEN1酶进行定量检测，而且进行了细胞成像。与传统的酶联免疫吸附测定(ELIS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.免标记的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述免标记的荧光探针的制备方法如下：将金纳米粒子与ssDNA溶液混合涡旋后得到混合溶液，在混合溶液加入柠檬酸缓冲溶液，然后加入HEPES缓冲溶液，离心洗去多余ssDNA即得。/n

【技术特征摘要】
1.免标记的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述免标记的荧光探针的制备方法如下：将金纳米粒子与ssDNA溶液混合涡旋后得到混合溶液，在混合溶液加入柠檬酸缓冲溶液，然后加入HEPES缓冲溶液，离心洗去多余ssDNA即得。


2.根据权利要求1所述的免标记的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述金纳米粒子浓度为10~12nM，所述ssDNA浓度为100nM。


3.根据权利要求1所述的免标记的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述柠檬酸缓冲溶液为500mM柠檬酸，pH2.5~3.5；HEPES缓冲溶液为500mMHEPES，pH6.5~7.5。


4.权利要求1~3任一项所述的制备方法制备得到的免标记的荧光探针。


5.基于免标记的荧光探针构建的FEN1酶活性检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：将权利要求4所述的免标记的荧光探针与酶反应缓冲溶液混合，然后加...

【专利技术属性】
技术研发人员：卫伟，王晨晨，刘松琴，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32