本发明专利技术公开了一种用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条，其包括基板，所述基板上依次设有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫的一部分叠覆于所述胶体金标记垫上，所述胶体金标记垫的一部分叠覆于所述硝酸纤维素膜上，所述吸水纸的一部分与所述硝酸纤维素膜搭接，所述胶体金标记垫含有羊抗人IgM抗体‑胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线，所述第一检测线包被有腺病毒特异性抗原多肽‑载体蛋白，所述对照线包被有人IgM抗体。本发明专利技术提供的IgM抗体胶体金试纸条具有操作简单、检测快速、成本低廉等特点。
【技术实现步骤摘要】
用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条及其制备方法
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条。
技术介绍
腺病毒是无包膜的DNA病毒，目前包含有85种病毒亚型，能够感染呼吸道、胃肠道、尿道、膀胱、眼和肝脏等。其中腺病毒引发的肺炎在儿童中较常见，约占儿童肺炎的10％，其中大部分的腺病毒感染症状较轻，但是也有部分会形成重症，严重可导致患者死亡。腺病毒引发的重症因素较多，跟患儿的免疫状态、年龄有一定的关系，另外腺病毒引起肺炎重症跟腺病毒亚型有密切关系，引发腺病毒重症肺炎主要有3型、4型、7型、55型腺病毒亚型。目前腺病毒没有任何的特效药，临床主要是采用对症治疗的方法，因此腺病毒的早期诊断特别是腺病毒亚型的检测是对医生诊疗方案的制定有很大的指导意义的。目前腺病毒分型主要是中和抗体血清型测试方法和核酸序列分型测试方法。其中血清型中和抗体操作过程比较复杂，需要先从病人标本中分离培养到腺病毒，测试分离的腺病毒TCID50数值，再用特异血清型血清标本与100TCID50腺病毒进行微量中和抗体测试，时间需要3周以上。这个方法由于操作需要有专业培训的技术人员，要具备专业的细胞和病毒实验室，并且操作时间比较长，因此中和抗体血清型测试方法只能应用科研工作，无法满足日常临床的诊断工作。核酸序列分型的方法是抽提患者标本中的病毒核酸，选用特异腺病毒亚型荧光PCR诊断试剂盒(内有特异针对腺病毒的引物和探针)进行测试。该方法灵敏度高，特异性强，是腺病毒分型的主流方法。但是该方法需要国家认证的PCR实验室，需要经过专业培训合格的技术员，还需要昂贵的荧光PCR仪器，因此无法很好应用于基层医疗单位的日常检测。另外腺病毒分型也可以采用宏基因组测试，宏基因组是以环境中所有微生物基因组为研究对象，通过对环境样品中的全基因组DNA进行高通量测序，获得单个样品的饱和数据量，基于denovo组装进行微生物群落结构多样性，微生物群体基因组成及功能，特定环境相关的代谢通路等分析，可以有效对腺病毒进行分型测试。但是宏基因组测试成本昂贵，一般患者都承受不起。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对以上技术缺陷提供一种操作简单，能够快速、准确地检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条。为了实现以上目的，本专利技术提供了一种用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条，该IgM抗体胶体金试纸条包括基板，所述基板上依次设有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫的一部分叠覆于所述胶体金标记垫上，所述胶体金标记垫的一部分叠覆于所述硝酸纤维素膜上，所述吸水纸的一部分与所述硝酸纤维素膜搭接，所述胶体金标记垫含有羊抗人IgM抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线，所述检测线包被有腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白，所述对照线包被有人IgM抗体。优选地，所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽是3型腺病毒特异性抗原多肽、4型腺病毒特异性抗原多肽、7型腺病毒特异性抗原多肽或55型腺病毒特异性抗原多肽中的一种或多种。作为一种优选的实施方式，所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为3型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.1所示(氨基酸序列位于3型腺病毒的六邻体第136位到第189位)。作为一种优选的实施方式，所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为4型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.2所示(氨基酸序列位于4型腺病毒的六邻体第136位到第183位)。作为一种优选的实施方式，所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为7型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.3所示(氨基酸序列位于7型腺病毒的六邻体第261位到第308位)。作为一种优选的实施方式，所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为55型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.4所示(氨基酸序列位于7型腺病毒的六邻体第132位到第180位)。作为一种优选的实施方式，根据本专利技术的IgM抗体胶体金试纸条中，所述腺病毒特异性多肽-载体蛋白根据EDC方法将腺病毒特异性多肽与载体蛋白进行化学交联获得。优选地，所述载体蛋白是BSA、KLH、OVA中的任意一种或多种。最优选为KLH蛋白。另一方面，本专利技术还提供了一种同时检测多种腺病毒的试剂盒，其包括至少两个所述IgM抗体胶体金试纸条，并且每个IgM抗体胶体金试纸条中的腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽不同，所述腺病毒特异性抗原多肽选自3型腺病毒特异性抗原多肽、4型腺病毒特异性抗原多肽、7型腺病毒特异性抗原多肽、55型腺病毒特异性抗原多肽中的任意两种或更多种。优选地，上述同时检测多种腺病毒的试剂盒包括四个所述IgM抗体胶体金试纸条，并且每个IgM抗体胶体金试纸条中的腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽分别为3型腺病毒特异性抗原多肽、4型腺病毒特异性抗原多肽、7型腺病毒特异性抗原多肽和55型腺病毒特异性抗原多肽。另一方面，本专利技术还提供了根据本专利技术的IgM抗体胶体金试纸条的制备方法，其包括如下步骤：步骤1：制备所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白；步骤2：制备含有所述羊抗人IgM抗体-胶体金标记物的胶体金标记垫；步骤3：将所述样品垫、所述胶体金标记垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸粘贴在所述基板上；步骤4：将所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白和所述人IgM抗体喷涂在所述硝酸纤维素膜上。优选地，所述步骤1的具体操作如下：将2mgKLH蛋白用0.2ml的0.1MMES溶解，将2mg腺病毒特异性抗原多肽用0.5ml的0.1MMES溶解，然后将两种溶液混合，再加入50μl质量体积浓度为1％的EDC溶液，混合均匀，室温下反应，透析，得到所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白。优选地，所述步骤2的具体操作如下：100ml的超纯水加热沸腾后加入1-1.5ml的氯金酸，搅拌均匀后迅速加入1-1.5ml的1％(质量浓度)柠檬酸三钠溶液，液体变成红色后继续沸腾10min，冷却至常温，将胶体金溶液倒入烧杯中，放置到磁力搅拌器上搅拌，同时用0.2M碳酸钾调整pH至8.0，然后加入1ml羊抗人IgM抗体，磁力搅拌30min，加入0.1ml封闭液磁力搅拌10min，然后取出标记好羊抗人IgM抗体的胶体金溶液，9000g离心30min，弃去上清，加入10ml胶体金稀释液重悬胶体金沉淀，充分混匀后喷涂到所述胶体金标记垫上，真空冷冻干燥。优选地，所述步骤4的具体操作如下：用包被缓冲液稀释人IgM抗体、3型腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白，其中人IgM抗体的浓度为1mg/ml，3型腺病毒抗原多肽-载体蛋白浓度为0.5mg/ml，然后均匀喷涂到所述硝酸纤维素膜上。本专利技术还提供一种能够区分3型、4型、7型、55型腺病毒的免疫快速分型诊断方法，其利用3型、4型、7型本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述IgM抗体胶体金试纸条包括基板，所述基板上依次设有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫的一部分叠覆于所述胶体金标记垫上，所述胶体金标记垫的一部分叠覆于所述硝酸纤维素膜上，所述吸水纸的一部分与所述硝酸纤维素膜搭接，所述胶体金标记垫含有羊抗人IgM抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线，所述检测线包被有腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白，所述对照线包被有人IgM抗体。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测腺病毒的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述IgM抗体胶体金试纸条包括基板，所述基板上依次设有样品垫、胶体金标记垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫的一部分叠覆于所述胶体金标记垫上，所述胶体金标记垫的一部分叠覆于所述硝酸纤维素膜上，所述吸水纸的一部分与所述硝酸纤维素膜搭接，所述胶体金标记垫含有羊抗人IgM抗体-胶体金标记物，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和对照线，所述检测线包被有腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白，所述对照线包被有人IgM抗体。
2.根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为3型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.1所示。
3.根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为4型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.2所示。
4.根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为7型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.3所示。
5.根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述腺病毒特异性抗原多肽-载体蛋白中的腺病毒特异性抗原多肽为55型腺病毒特异性抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQIDNO.4所示。
6.根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条，其特征在于：所述腺病毒特异性多肽-载体蛋白根据EDC方法将腺病毒特异性多肽与载体蛋白进行化学交联获得。
7.一种同时检测多种腺病毒的试剂盒，其特征在于包括至少两个根据权利要求1所述的IgM抗体胶体金试纸条，并且...
【专利技术属性】
技术研发人员：周荣，王长兵，李潇，刘文宽，田新贵，游爱萍，周志超，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，广州呼吸健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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