荧光纳米粒子的制备及其在细胞表面糖检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷修饰的荧光纳米粒子的制备方法及其在细胞表面糖检测中的应用，包括通过可逆加成片段链转移聚合法合成甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷，然后通过可逆加成片段链转移沉淀聚合法合成表面具有亲水性聚合刷的荧光纳米粒子并在其表面接枝上糖的识别原件——苯硼酸，制成细胞表面糖的荧光探针；本荧光纳米粒子表面的高亲水性聚合物刷具有抵抗蛋白的能力，在其表面接枝糖识别元件——苯硼酸使其对具有顺位二醇结构的糖有荧光响应，具有很好的选择性和特异性，能实现在复杂生物样品中对糖的特异性检测。该荧光纳米粒子制备工艺简单易行，易于规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
荧光纳米粒子的制备及其在细胞表面糖检测中的应用
本专利技术涉及甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷修饰的荧光纳米粒子的制备方法及其在细胞表面糖检测中的应用。
技术介绍
细胞表面的糖基参与细胞识别，并在生物信号传导以及肿瘤发生和转移过程中起到重要的作用。而不同的细胞表面的聚糖种类也不尽相同，相同的细胞在其不同的生长、分化过程中所表达的聚糖种类也会有较大的差别。其中及其有意义的聚糖变化体现在细胞发生癌变时会伴随其表面唾液酸的过表达现象。但是目前来看，糖分子结构复杂性，糖苷键的类型也有所不同，因此针对糖的研究困难重重，与同样是生物体重要组成部分的蛋白质、核酸比起来要滞后的多。近年来，相继发展了气相色谱法、高效液相色谱法、液质联用法以及酶联免疫法等，这些方法往往存在灵敏度低，特异性差或操作复杂，或仪器昂贵的缺点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：克服现有技术存在的问题，提供一种甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷修饰的荧光纳米粒子，该荧光纳米粒子选择性高，灵敏度高，其表面高分子刷的接枝能提高荧光纳米粒子的亲水性，可有效减少非特异性吸附，提高荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷修饰的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括通过可逆加成片段链转移聚合法合成甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷，然后通过可逆加成片段链转移沉淀聚合法合成表面具有亲水性聚合刷的荧光纳米粒子并在其表面接枝上糖的识别原件——苯硼酸，制成细胞表面糖的荧光探针；/n其具体包括以下步骤：/nS1、甲基丙烯酸甘油酯的制备：用10％的高氯酸水解甲基丙烯酸缩水甘油酯，得到亲水性单体甲基丙烯酸甘油酯；/nS2、聚甲基丙烯酸甘油酯的制备：将亲水性单体甲基丙烯酸甘油酯、引发剂偶氮二异丁晴、小分子链转移剂二硫代苯甲酸异丙苯酯在甲醇中反应制成亲水性聚合物刷聚甲基丙烯酸甘油酯；/nS3、荧光纳米粒子的制...

【技术特征摘要】
1.甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷修饰的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括通过可逆加成片段链转移聚合法合成甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷，然后通过可逆加成片段链转移沉淀聚合法合成表面具有亲水性聚合刷的荧光纳米粒子并在其表面接枝上糖的识别原件——苯硼酸，制成细胞表面糖的荧光探针；
其具体包括以下步骤：
S1、甲基丙烯酸甘油酯的制备：用10％的高氯酸水解甲基丙烯酸缩水甘油酯，得到亲水性单体甲基丙烯酸甘油酯；
S2、聚甲基丙烯酸甘油酯的制备：将亲水性单体甲基丙烯酸甘油酯、引发剂偶氮二异丁晴、小分子链转移剂二硫代苯甲酸异丙苯酯在甲醇中反应制成亲水性聚合物刷聚甲基丙烯酸甘油酯；
S3、荧光纳米粒子的制备：将聚甲基丙烯酸甘油酯、偶氮二异丁晴、二硫代苯甲酸异丙苯酯、荧光单体2-羟基乙基丙烯酸-9-蒽甲酸酯、功能单体甲基丙烯酸在乙腈和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中反应，得到表面具有亲水性聚合物刷的荧光纳米粒子；
S4、接枝苯硼酸的荧光纳米粒子的制备：将荧光纳米粒子、对氨基苯硼酸溶液、1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐在PBS缓冲液中反应使亲水性聚合物刷修饰的荧光纳米粒子表面接枝上苯硼酸。


2.根据权利要求1所述的甲基丙烯酸甘油酯亲水性刷修饰的荧光纳米粒子的制备方法，其特征在于，S1的具体过程为：
S1-1、将10％的高氯酸于20℃下滴加到甲基丙烯酸缩水甘油酯中搅拌反应2h，用氢氧化钾中和未反应的高氯酸，过滤沉淀，得澄清溶液；
S1-2、将澄清溶液用石油醚萃取五次，加氯化钠用乙酸乙酯萃取两次，旋蒸；
S1-3、再用无水MgSO4干燥过夜，产物用中性Al2O3过柱后，在室温真空干燥8h，收集剩余溶液，于-4℃冰箱封口保存。


3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨雅琼，李以婷，明灯明，王雪晴，郝爱月，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32