一种葡萄牙棒孢酵母及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种葡萄牙棒孢酵母及其用途，其形态特征：将菌种划线接种于PDA培养基上，28℃培养2d，菌落直径5～8 mm，菌落圆形埑状，颜色乳白色，质地呈奶油状，不透明，菌落边缘呈毯状。本发明专利技术能产醇类、酯类物质。

A Portuguese Corynespora yeast and its application

【技术实现步骤摘要】
一种葡萄牙棒孢酵母及其用途
本专利技术属于生物
，具体涉及一种葡萄牙棒孢酵母，同时涉及该葡萄牙棒孢酵母在产醇类、酯类物质中的用途。
技术介绍
酒类的酿造以酿造酵母的特征及能力为根本条件。现代酒类的酿造生产更是注重对酵母的选择和使用。国际上蒸馏酒的发酵基本上使用商业化专用酵母产品，完全实现了对蒸馏酒的自动化生产。传统的发酵酒如啤酒、葡萄酒、日本清酒也完成了专用酵母的商品化，尤其是日本清酒，对传统百年品牌专用酵母品种的确定及功能的分析即完善又详细，并很多是以酵母的特征而命名的。酿酒专用酵母的确定是国外蒸馏酒和日本清酒能够实现国际化的基础保证。在我国，啤酒、葡萄酒采用是进口商品酵母，白酒和米酒依然是以制曲及传统酿造方式来完成的。中国的米酒与日本清酒有异曲同工之妙，我国米酒产地分布广泛，具有世界最悠久的历史，虽然在全世界中国米酒长期以来被视为世界文明的瑰宝，但目前已陷入无法智能化、世界化的尴尬境地。在中国传统米酒酿造环境中分离筛选有效的特征功能酵母菌，使之工业化应用，是迫在眉睫的重中之重。酵母的酿造功能即产生的醇类，除乙醇外，产生高级醇如异戊醇、异丁醇、苯乙醇等，酯类如乙酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、棕榈酸乙酯、乙酸异戊酯等物质，赋予发酵酒一定魅力。根据现有报道，米酒中酵母的产酒能力在8%Vol以上，发酵液中高级醇含量应控制在324.98mg/L以内，主要香气成分以为异丁醇、乙酸乙酯、异戊醇、乙酸、β-苯乙醇、辛酸乙酯、乙酸苯乙酯、乙酸异戊酯为主，现有报道中有：酿酒酵母、扣囊复膜酵母、栗酒裂殖酵母等菌株，而具有此类功能的葡萄牙棒孢酵母未有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株产醇类、酯类物质的葡萄牙棒孢酵母。本专利技术的另一目的在于提供该葡萄牙棒孢酵母在产醇类、酯类物质中的用途。本专利技术的一种葡萄牙棒孢酵母，其形态特征：将菌种划线接种于PDA培养基上，28℃培养2d，菌落直径5～8mm，菌落圆形埑状，颜色乳白色，质地呈奶油状，不透明，菌落边缘呈毯状。该菌种已2019年8月30日保藏到中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCCM2019675，名称：葡萄芽棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)。本专利技术的一种葡萄芽棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)的分离方法，包括以下步骤：（一）对葡萄芽棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)的分离：从贵州水族米酒小曲中，取粉碎的小曲样品10g,加入装有90ml无菌生理盐水和玻璃珠的三角瓶中，28℃摇床振荡30min，混匀。在超净工作台中吸取1mL菌悬液注入装有9mL无菌生理盐水的试管中，进行梯度稀释，取10-1，10-2，10-3、10-4和10-5梯度分别进行倾注和涂布平板。28℃倒置培养2d后计数,并选择具有典型酵母菌落形态的单菌落，接种划线到PDA琼脂培养基上，重复3～4次，直至获得纯种菌种，然后将各菌株分别编号，最后斜面划线低温保藏。（二）培养：葡萄牙棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)采用的培养基：鉴定培养基：孟加拉红培养基，蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，氯霉素0.1g，1/3000孟加拉红溶液100mL，蒸馏水1000。保藏培养基：麦芽汁琼脂培养基，麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15/L,PH5.8—6.2。种子培养基：葡萄糖1g，酵母膏0.5g，蛋白胨1g,蒸馏水50mL,121℃灭菌20min。液态发酵培养基：葡萄糖10g，酵母膏0.5g，蛋白胨1g,蒸馏水50mL,115℃灭菌20min。（三）菌种的保种和传代：1、菌种保藏培养基：①麦芽汁琼脂培养基：麦芽膏粉130g/L,氯霉素0.1g/L,琼脂15g/L,PH5.8—6.2，115℃灭菌20min。②YEPD（YPD）培养基：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂20g,蒸馏水1000ml，pH6.0,115℃灭菌20min。2、保存方法有4种：①传代培养酵母菌种保存法：将酵母接种于麦芽汁琼脂斜面培养基上，置温箱28℃培养2d后，将橡胶塞用灭菌固体石蜡熔封，移至4℃冰箱保存，一般酵母在4℃冰箱内可以保存一个月,需定期移植。②砂土管酵母菌种保存法：取清洁的海沙，用1mol/L的氢氧化钠溶液清洗，然后再用1mol/L的盐酸溶液清洗，在后用流水冲洗。分装试管，约2-3厘米深，干热灭菌，加入酵母培养液1mL左右与砂土混匀，置真空干燥管内干燥，待完全干燥后熔封保存。③真空冷冻干燥酵母菌种保存法：将待保存的微生物细胞或者孢子悬浮在合适的保护剂中，预先将细胞冷冻，使水冻结，然后在真空条件下，使冰升华以除去大部分水，残留的一些不冻结的水分，再通过蒸发从细胞中除去。④液体石蜡法：亦称矿物油保藏法，将酵母菌种接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养至待得到健壮的菌体后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存的一种菌种保藏方法，是定期移植保藏法的辅助方法。（四）菌种的生态特征：该菌形成的菌落在PDA培养基上，28℃培养2d，菌落直径5～8mm，菌落圆形埑状，颜色乳白色，质地呈奶油状，不透明，菌落边缘呈毯状。菌落易挑起。细胞为卵圆形，细胞2.59～4.19μm，长3.95～6.03μm，能形成假菌丝及产子囊孢子。（五）菌种的培养特性（1）培养温度20℃～30℃，最适温度28℃～30℃；（2）培养pH3～7.5，最佳范围为4.5～5.0。细胞为卵圆形，细胞2.59～4.19μm，长3.95～6.03μm，有假菌丝及产子囊孢子，芽殖，根据《酵母菌的特征及鉴定手册》，从样品中经筛菌、分离、纯化、镜检、生理生化以及采用16SrDNA测序，将测得序列在DNAMAN软件中进行序列反转，在NCBI中进行BLAST比对，再用MEGA5软件建立所分离菌株的系统发育树，确定所分离的菌株为葡萄牙棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)。本专利技术的一种葡萄牙棒孢酵母在产醇类、酯类物质中的用途。本专利技术与现有技术相比,具有明显的有益效果,从以上技术方案可知:本专利技术的葡萄牙棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)对温度、pH等自然环境条件的适应范围广，对不良环境的耐受力强，容易培养和保存及工业化生产，生产成本低，不污染环境，不破坏生态平衡。具体实施方式一种葡萄芽棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitan本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种葡萄芽棒孢酵母 FBKL2.0455 (

【技术特征摘要】
1.一种葡萄芽棒孢酵母FBKL2.0455(Clavisporalusitaniae，FBKL2.0455)，其特征在于所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓丹，邱树毅，罗小叶，周鸿翔，班世栋，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52