一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭的方法技术

本发明专利技术提供了一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭的方法，即以棘颊雀鲷为宿主鱼，建立了鱼蛭的人工培养传代体系，可以稳定地、大量获得海水鱼蛭，从而弥补现有技术的不足。本发明专利技术建立了一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭Z.arugamensis的方法，能够经济地、方便地、随时随地获得不同发育阶段的鱼蛭卵茧，以及大量的幼蛭和成蛭，从而突破海水鱼蛭繁育的瓶颈，为鱼蛭病的病原、病理、致病机制、检测和防控提供重要的生物材料。

A method of artificial culture of sea fish leech with Sparus spinosus

【技术实现步骤摘要】
一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭的方法
本专利技术属于水产养殖
，具体涉及一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭(Zeylanicobdellaarugamensis)的方法。
技术介绍
海水鱼蛭Z.arugamensis是海水鱼类养殖中重要的体外寄生虫。在寄生虫分类方面，鱼蛭Z.arugamensis隶属于环节动物门(Annelida)，寡毛纲(Oligochaete)，蛭目(Hirudinida)，鱼蛭科(Piscicolidae)，Zeylanicobdella属。海水鱼蛭Z.arugamensis主要寄生在海水鱼类的胸鳍、腹鳍及其基部，其次是尾鳍、臀鳍、背鳍和眼睛等部位。寄生时使鱼体消瘦、营养不良、体表产生创伤，进而引起继发感染。鱼蛭Z.arugamensis还可作为细菌、病毒和别的寄生虫的传播媒介，严重时可导致鱼类死亡。鱼蛭Z.arugamensis主要流行于东南亚，近年来在我国海水养殖鱼类中也频繁出现。由于其一直寄生于鱼体表吸血，直到发育成熟才会离开宿主鱼产茧繁殖后代，且繁殖力强、繁殖速度快，因此危害很大。研究鱼蛭Z.arugamensis的生活史、探索能有效杀灭鱼蛭而不损伤宿主鱼的方法，具有重要的现实意义。由于鱼类寄生虫(包括鱼蛭)不像鱼类细菌、病毒那样容易人工培养和繁殖，目前除了能在病鱼体表采集少量的寄生虫以外，很难获得足量的寄生虫样品供研究工作使用。鱼蛭的大量人工繁育已成为相关研究工作的瓶颈，导致目前国内外对鱼蛭Z.arugamensis的研究较少。所以需要建立一种方便、高效的人工培养鱼蛭的方法，来获取足够多的、不同发育阶段的生物材料，供鱼蛭病的病原、病理、致病机制、检测与防治等工作使用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭的方法，即以棘颊雀鲷为宿主鱼，建立了鱼蛭的人工培养传代体系，可以稳定地、大量获得海水鱼蛭，从而弥补现有技术的不足。本专利技术提供一种培养海水鱼蛭的方法，是使用棘颊雀鲷作为宿主来培养海水鱼蛭；本专利技术所提供的方法，包括如下的步骤：1)养殖棘颊雀鲷宿主鱼挑选体长3～5cm的健康棘颊雀鲷进行暂养，暂养的条件是海水水温26℃、盐度30；暂养期间每天换1/3海水，投喂一次；2)挑选种蛭选取体长在10mm以上的成熟海水鱼蛭作为种蛭；3)生产卵茧将挑选好的种蛭放入盐度30的无菌过滤海水中，在26℃恒温培养，每2d换1/2海水；3～4d后移除种蛭；4)孵化卵茧将卵茧继续在26℃的海水中孵化，每2d换1/2海水；5)培育幼蛭将孵出的幼蛭转移到棘颊雀鲷宿主鱼的养殖容器中，使幼蛭将棘颊雀鲷作为宿主营寄生生活；幼蛭发育为成蛭。本专利技术建立了一种使用棘颊雀鲷人工培养海水鱼蛭Z.arugamensis的方法，能够经济地、方便地、随时随地获得不同发育阶段的鱼蛭卵茧，以及大量的幼蛭和成蛭，从而突破海水鱼蛭繁育的瓶颈，为鱼蛭病的病原、病理、致病机制、检测和防控提供重要的生物材料。说明书附图图1：鱼蛭Z.arugamensis卵茧的发育过程，其中：a.0h；b.36h；c.96h；d.120h；e.144h；f.180h；g.204h；h.216h；i.幼蛭脱茧后的卵茧空壳；标尺＝100μm图2：初孵幼蛭图；其中：实线箭头为眼点，虚线箭头为长吻。图3：用棘颊雀鲷培育幼蛭图，其中a.培育1d后；b.培育11d后。图4：发育好的Z.arugamensis成蛭图。具体实施方式棘颊雀鲷(Premnasbiaculeatus)俗称透红小丑鱼，是雀鲷科(Pomacentridae)棘颊雀鲷属(Premna)的一种海水观赏鱼类。申请人发现棘颊雀鲷作为海水鱼蛭的宿主能有效地扩增海水鱼蛭，并对养殖方法进行了优化，从而促成了本专利技术。以下将结合具体实施例对本专利技术的方法进行详细说明。实施例1：孵化卵茧及生产幼蛭1)挑选种蛭选取体长在10mm以上体型大、活力好、身体健全的16条成蛭Z.arugamensis作为种蛭。2)生产卵茧将挑选好的种蛭放入12孔细胞培养板中，每孔1条，各孔中含2mL盐度30的无菌过滤海水，于26℃恒温培养箱中培养，每2d换1/2海水。4d后移除种蛭，观察产卵茧情况。在此期间，16条种蛭共产茧259个。3)孵化卵茧卵茧继续在26℃恒温培养箱中孵化，每2d换1/2海水。10d后，259个卵茧共孵出幼蛭217个，孵化率为83.78％。4)观察卵茧发育随机选取20枚卵茧，在倒置显微镜下观察卵茧的发育过程。鱼蛭卵茧呈黄棕色，外形似一个立体封闭的头盔状，底部接近椭圆形，最外圈是一个粘液环，附着在细胞培养板壁上。卵茧两端有一大一小两个圆栓，受精卵就在两圆栓之间，浮在蛋白营养液里(图1a)。卵茧平均直径为0.658±0.060mm(n＝50)，大部分介于0.650～0.700mm之间(n＝17)。鱼蛭新产生的卵茧内部有许多黑色的长丝状结构，遮住了受精卵和圆栓(图1a)，2h内消失，一个茧内只有一个受精卵。卵茧发育的前36h胚胎体积增加较缓慢(图1b)。此后胚胎形状和体积均有明显的变化，表现为胚胎开始有活跃的大幅度的收缩动态、体积急剧增加，最大时几乎充满整个茧。96h后胚胎最外层出现神经索(图1c)，120h后可观察到长吻(图1d)。144h后，虫体变长，可观察到前后两个吸盘(图1e)。180h后，前吸盘背面出现一对三角形黑色眼点，体色也加深(图1f)。204h后，身体出现了密集均匀的体环，除吸盘外整个身体呈圆柱形，此时已经发育为幼蛭，非常活跃，等待脱茧而出(图1g)。216h后幼蛭脱茧，幼蛭头部先顶开大圆栓，然后前吸盘带着身体钻出(图1h)。最后仅剩下空茧(图1i)。在水温26℃、盐度30的条件下，鱼蛭卵茧发育为自由游动的幼蛭需要216h，即9d。5)生产幼蛭刚孵出的幼蛭身体呈半透明的圆柱状，有前后两个吸盘(图2a)，前吸盘背面有一对黑色的三角形眼点，颈部有长吻(图2b)。初孵幼蛭静止时身体长度为1.28±0.077mm(n＝50)，宽度为0.12±0.009mm(n＝50)。幼蛭孵出后如未能成功寄生，则身体不会长大，在5～8d后死亡。实施例2：用棘颊雀鲷培育幼蛭1)棘颊雀鲷宿主鱼的养殖挑选6尾体长3～5cm的健康棘颊雀鲷，养殖于3个2L的玻璃烧杯中，每烧杯2尾。养殖期间海水水温26℃、盐度30。每天换1/3海水，投喂一次。2)幼蛭的发育将孵出的30条幼蛭转移到上述含棘颊雀鲷宿主鱼的烧杯中，每烧杯10条幼蛭。幼蛭会自主寻找寄主鱼，陆续附着到宿主鱼的鱼鳍基部、眼睛等部位，营寄生生活(图3)。1d后幼蛭由于吸食宿主鱼的血液身体由半透明变为黑色，体长约2.2mm，身体变粗(图3a)。幼蛭以每天约1mm的速度长大，身体由粗细均匀的圆柱状，慢慢变为成蛭状，可以区分出窄短的颈部和宽长扁的躯干部。大约本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养海水鱼蛭的方法，其特征在于，所述的方法是使用棘颊雀鲷作为宿主来培养海水鱼蛭。/n

【技术特征摘要】
1.一种培养海水鱼蛭的方法，其特征在于，所述的方法是使用棘颊雀鲷作为宿主来培养海水鱼蛭。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
1)养殖棘颊雀鲷宿主鱼
挑选体长3～5cm的健康棘颊雀鲷进行暂养；
2)挑选种蛭
选取体长在10mm以上的成熟海水鱼蛭作为种蛭；
3)生产卵茧
将挑选好的种蛭放入盐度30的无菌过滤海水中，在26...

【专利技术属性】
技术研发人员：史成银，任宁欣，万晓媛，谢国驷，王仁宝，李晨，刘莉，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37