一种辐射生物剂量计、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种辐射生物剂量计、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述生物剂量计为在大肠杆菌的SoxR启动子下游加入EGFP基因构成的SoxR辐射生物剂量计或在大肠杆菌的Cda启动子下游加入EGFP基因构成的Cda辐射生物剂量计。所述辐射生物剂量计可在线实时监测物理辐射剂量的大小，具有广泛的检测和应用范围；应用了微生物的群体效应作为生物信号放大系统，灵敏度较现有相关检测技术有大幅提高；后期将所述辐射生物剂量计置于微流控芯片中培养，可实现在线实时监测，实现商品化生产，携带方便，检测快速，可随时提供环境中细胞毒性物质和辐射剂量的大小，为检测损伤剂量大小提供参考。

A radiation biological dosimeter, preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种辐射生物剂量计、制备方法及应用
本专利技术涉及一种辐射生物剂量计、制备方法及应用，具体地说，涉及一种运用生物技术改造基因序列的微生物作为辐射剂量的生物计量法，对低线性能量传递(LinearEenergyTransfer,LET)物理辐射及紫外线辐射进行监测，检测时间短，结果直观可见，且响应强度和辐射剂量存在一定的量效关系，通过荧光强度值的大小反映环境中所述辐射的细胞毒性大小，而且对化学细胞损伤试剂具有响应，具有检测广谱性；属于生物

技术介绍
水污染、噪音污染、空气污染和辐射被称为四大环境污染。按照辐射产生的生物学效应，分为电离辐射和非电离辐射两大类：当辐射能量达到12eV以上时，可使原子或分子丢失电子而生成带电的离子，导致生物组织产生相应的电离反应，机体受到较为严重的损伤，这类辐射称之为电离辐射；而当能量小于12eV时，辐射能量不足以直接使生物组织中的相关物质电离，称之为非电离辐射。辐射诱发产生自由基，造成细胞器的损伤，进而导致整个细胞损伤，甚至使机体发生病变和死亡。因辐射造成的生物机体的相关效应即为辐射生物学效应，包括蛋白质的损本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辐射生物剂量计，其特征在于：所述生物剂量计为SoxR辐射生物剂量计或Cda辐射生物剂量计；/n所述SoxR辐射生物剂量计为在大肠杆菌基因序列中的SoxR启动子基因下游加入EGFP基因的基因工程菌；/n所述Cda辐射生物剂量计为在所述SoxR辐射生物剂量计的基础上，用Cda启动子基因序列替代SoxR启动子基因序列得到的基因工程菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种辐射生物剂量计，其特征在于：所述生物剂量计为SoxR辐射生物剂量计或Cda辐射生物剂量计；
所述SoxR辐射生物剂量计为在大肠杆菌基因序列中的SoxR启动子基因下游加入EGFP基因的基因工程菌；
所述Cda辐射生物剂量计为在所述SoxR辐射生物剂量计的基础上，用Cda启动子基因序列替代SoxR启动子基因序列得到的基因工程菌。


2.根据权利要求1所述的一种辐射生物剂量计，其特征在于：所述SoxR辐射生物剂量计中携带目的基因的载体的核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQIDNo.1；
所述Cda辐射生物剂量计中携带目的基因的载体的核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQIDNo.2。


3.根据权利要求1所述的一种辐射生物剂量计，其特征在于：所述大肠杆菌为模板大肠杆菌MG1655或宿主大肠杆菌DH5α。


4.一种如权利要求1～3中任一项所述的一种辐射生物剂量计的制备方法，其特征在于：
(1)以大肠杆菌基因组为模板，采用PCR扩增目的基因SoxR启动子；以质粒pColD-CA23的基因组为模板，采用PCR扩增目的基因Cda启动子；以利用密码子简并性优化的含EGFP基因序列的PUC19克隆质粒基因组为模板，所述优化的PUC19克隆质粒基因组核苷酸序列为核苷酸序列表中的SEQIDNo.3，采用PCR扩增目的基因EGFP；将PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分离，获得所述目的基因片段DNA；
所述目的基因及对应引物如下表所示：
表目的基因及对应引物



(2)将目的基因SoxR启动子片段DNA用EcoRI和XbaI酶切，EGFP片段DNA用XbaI和HindIII酶切，将酶切后的SoxR启动子片段DNA用T4连接酶与酶切后的EGFP片段DNA连接，然后进行琼脂糖凝胶电泳分离，获得大小约1500bp的序列条带，用EcoRI和HindIII酶切，将酶切产物分别与相同用EcoRI和HindIII酶切后的PUC57表达载体用T4连接酶连接，获得所述SoxR辐射生物剂量计中携带目的基因的载体，其核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQIDNo.1；或将目的基因Cda启动子片段DNA用EcoRI和XbaI酶切，EGFP片段DNA用XbaI和HindIII酶切，将酶切后的Cda启动子片段DNA用T4连接酶与酶切后的EGFP片段DNA连接，然后进行琼脂糖凝胶电泳分离，获得大小约1500bp的序列条带，用EcoRI和HindIII酶切，将酶切产物分别与相同用EcoRI和HindIII酶切后的PUC57表达载体用T4连接酶连接，获得所述Cda辐射生物剂量计中携带目的基因的载体，其核苷酸全序列为核苷酸序列表中的SEQIDNo.2；
(3)将所述SoxR辐射生物剂量计中携带目的基因的载体转化进入大肠杆菌感受态细胞，筛选，验证正确，得到所述的SoxR辐射生物剂量计；或将所述Cda辐射生物剂量计中携带目的基因的载体转化进入大肠杆菌感受态细胞，筛选，验证正确，得到所述的Cda辐射生物剂量计。


5.根据权利要求4所述的一种辐射生物剂量计的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中：
以大肠杆菌MG1655基因组为模板，采用PCR扩增目的基因SoxR启动子；
步骤(3)中：
所述宿主细胞即大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌DH5α感受态细胞。


6.根据权利要求4所述的一种辐射生物剂量计的制备方法，其特征在于：
步骤(1)中：
PCR反应扩增体系如下：
上游引物1μL、下游引物1μL、模板1μL、含高保真DNA聚合酶的PCRMix10μL和无菌水7μL，总共为20μL的体系；
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【专利技术属性】
技术研发人员：张永谦，郝晓婷，邓玉林，
申请(专利权)人：北京理工大学，
类型：发明
国别省市：北京;11