一种从曲料中提取丝状真菌总RNA的方法技术

本发明专利技术公开了一种从曲料中提取丝状真菌总RNA的方法，包括步骤：1)预处理：筛选原料颗粒完整、饱满的固态发酵曲料样品，进行冷冻处理；2)初步研磨：将球状助研磨体加入步骤1)所得固态发酵曲料中，加入液氮并进行研磨，使曲料表面的菌体剥离脱落，同时保持曲料中原料颗粒完整；3)在初步研磨后，将原料颗粒除去，得到菌体混合物；4)充分研磨步骤3)所得菌体混合物，获得含菌体RNA的粉末料；5)向步骤4)所得粉末料中加入总RNA提取剂，提取总RNA，即得。本发明专利技术的方法适用于从曲料等复杂基质中提取丝状真菌的总RNA，该方法提取的丝状真菌总RNA纯度高、完整性好。

A method of extracting total RNA of filamentous fungi from Koji

【技术实现步骤摘要】
一种从曲料中提取丝状真菌总RNA的方法
本专利技术涉及RNA提取
，尤其是一种从曲料中提取丝状真菌总RNA的方法。
技术介绍
制曲是豆豉、酱油及豆酱发酵生产的必要过程，其中，酱油和豆酱的制曲过程是大豆、小麦等原材料在米曲霉、酱油曲霉等丝状真菌分泌的多种酶作用下被逐步降解的过程，其中米曲霉的使用最为广泛。在这个过程中，米曲霉分泌大量的蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等，目前的研究集中于酶活等理化性质鉴定，但是对其深层分子机理和表达调控研究甚少，其中曲料中真菌总RNA的提取技术是分子机理和表达调控研究的基础。现行的常规真菌总RNA提取方法主要包括CTAB法、热酚法、异硫氰酸胍法、Trizol法等，另外还可以使用柱离心法对RNA进行纯化。专利技术专利CN101638651B公布了一种改良Trizol法提取植物组织总RNA的方法，该方法特征在于用常规的Trizol法提取RNA后，加入氯仿/异戊醇再次抽提，并用异丙醇和醋酸钠沉淀RNA。该方法不适用于从曲料这种复杂基质中去除大豆、小麦大颗粒等成分，破碎菌丝细胞壁效率低，因此总RNA提取质量不佳。专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从曲料中提取丝状真菌总RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)预处理：/n筛选原料颗粒完整、饱满的固态发酵曲料样品，进行冷冻处理；/n2)初步研磨：/n将球状助研磨体加入步骤1)所得固态发酵曲料中，加入液氮并进行研磨，使曲料表面的菌体剥离脱落，同时保持曲料中原料颗粒完整；/n3)在初步研磨后，将所述原料颗粒除去，得到菌体混合物；/n4)充分研磨步骤3)所得菌体混合物，获得含菌体RNA的粉末料；/n5)向步骤4)所得粉末料中加入总RNA提取剂，提取总RNA，即得。/n

【技术特征摘要】
1.一种从曲料中提取丝状真菌总RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)预处理：
筛选原料颗粒完整、饱满的固态发酵曲料样品，进行冷冻处理；
2)初步研磨：
将球状助研磨体加入步骤1)所得固态发酵曲料中，加入液氮并进行研磨，使曲料表面的菌体剥离脱落，同时保持曲料中原料颗粒完整；
3)在初步研磨后，将所述原料颗粒除去，得到菌体混合物；
4)充分研磨步骤3)所得菌体混合物，获得含菌体RNA的粉末料；
5)向步骤4)所得粉末料中加入总RNA提取剂，提取总RNA，即得。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中曲料为豆豉、酱油或豆酱固态发酵所得曲料。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中冷冻处理的温度为-75～-86℃，优选为-80℃。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢景毅，侯莎，王晓文，童星，吴昌正，
申请(专利权)人：广东海天创新技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44