一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法技术

本发明专利技术公开了一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，包括以下步骤；S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒；S2向培养皿内添加培养基，培养基包括10‑15g牛肉汤、5‑10g蛋白胨、30‑50g氯化钠、10‑20g葡萄糖、5‑18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加杀菌剂；S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物；S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C及血清D加入噬菌体的宿主菌；本发明专利技术，筛选精度高。

A method of screening bacteriophages with antibacterial activity in vitro

【技术实现步骤摘要】
一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法
本专利技术涉及体内抗菌活性噬菌体的体外筛选
，具体为一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法。
技术介绍
现有的两种经典筛选技术从噬菌体抗体库中筛选表达特异性抗体的噬菌体的经典方法主要有两种将纯抗原包被在固相介质上，如酶标板、免疫试管或亲和层析柱，然后加入待筛选的噬菌体，洗去非亲和性或低亲和性的噬菌体，回收高亲和性的噬菌体风将抗原与生物素基团相连，再将其固定在包被有的顺磁珠上对噬菌体进行筛选。两种方法中均需加脱脂牛奶或，其效果较差封闭未被抗原占据的位点，以避免噬菌体非特异性的结合。对于前一方法，回收与抗原特异性结合的噬菌体可用碱性溶液如三乙基胺，或酸性溶液如甘氨酸一盐酸‘，洗脱，或用可溶的抗原或半抗原洗脱’几对于后一方法，用二琉基苏糖醇，通过破坏抗原与生物素之间的二硫键来洗脱。回收的噬菌体感染宿主菌，增殖后进行下一轮筛选。一般经过轮这样的筛选可得到表达高亲和性的目的抗体的克隆。经典筛选技术的前提条件是目标抗体所针对抗原的性质明确，能得到抗原纯品。对于抗原无法提纯或抗原性质不确定的情况，如癌细胞表面本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：包括以下步骤；/nS1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，；/nS2向培养皿内添加培养基，培养基包括10-15g牛肉汤、5-10g蛋白胨、30-50g氯化钠、10-20g葡萄糖、5-18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；/nS3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加杀菌剂；/nS4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物；/nS5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；/nS6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B...

【技术特征摘要】
1.一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：包括以下步骤；
S1选择合适的培养皿，对培养皿进行消毒，；
S2向培养皿内添加培养基，培养基包括10-15g牛肉汤、5-10g蛋白胨、30-50g氯化钠、10-20g葡萄糖、5-18g血液，并将这些物质混合配制成液体、半固体、固体的培养基；
S3从实验体上获取血清，分成四份，血清A、B不经任何处理，血清C只做灭活处理，血清D添加杀菌剂；
S4收集感染者从体内排向体外的分泌物，具体包括血、尿、便、脓液或其他分泌物；
S5对分泌物内的菌落进行选择，选取出带有噬菌体的宿主菌；
S6对四份血清分别作以下处理，血清A仍不做任何处理，血清B、血清C及血清D加入噬菌体的宿主菌；
S7将S5处理后的血清，置于光照下，将环境温度调至37度；
S8测量四份血清中的宿主菌活菌数，如果B、C、D中宿主菌的生长速度一致，且生长速度小于宿主菌在A中的生长速度，则该待筛选的噬菌体可以作为动物实验的候选噬菌体，反之则淘汰该待筛选的噬菌体。


2.根据权利要求1所述的一种体外筛选体内抗菌活性噬菌体的方法，其特征在于：所述S1中，消毒措施为酒精洗涤、紫外线杀菌或高温灭菌中的一种。


3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李先胜，杜新永，刘玉庆，张庆，罗成盛，马如霞，赵丹丹，
申请(专利权)人：瑞科盟青岛生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37