一种用于检测人类B-raf基因突变的PCR试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测人类B‑raf基因突变的PCR试剂盒及其应用，该试剂盒包括PCR反应液、引物探针混合液、阳性质控品和阴性质控品，所述引物探针混合液包括多对正反向引物、荧光探针和锁核酸探针，并且对引物探针浓度进行了优化，用于特异性扩增B‑raf基因突变型，突变位点除了V600，还包括非V600的密码子，检测范围更广。本发明专利技术结合锁核酸技术和荧光定量PCR技术检测B‑raf基因突变，简便易行，特异性高，灵敏度高达0.1％，对B‑raf基因非V600E突变的研究，为B‑raf基因在恶性肿瘤疗效与预后的临床应用中提供更加全面的依据。

A PCR kit for detecting human B-Raf gene mutation and its application

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测人类B-raf基因突变的PCR试剂盒及其应用
本专利技术涉及基因检测领域，尤其涉及一种用于检测人类B-raf基因突变的PCR试剂盒及其应用。
技术介绍
B-raf基因属于RAF家族一员，该基因位于人类7号染色体上，编码RAF家族丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。该蛋白在调节MAPK/ERK信号通路中起作用，影响细胞分裂，分化和分泌。B-raf基因突变出现在多种人类恶性肿瘤中，最常在黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤、结直肠癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌和多毛细胞白血病中发生突变。在过去的几十年里，随着对各个癌症肿瘤基因突变谱与信号通路研究的不断深人，针对基因变异推出的靶向药物给肿瘤的治疗带来了巨大的进步，在肠癌中抗EGFR、抗VEGF单抗已经成为患者治疗的重要选择。B-raf基因是肠癌中一个新的治疗靶点，且与患者预后有密切的关系，目前有多项BRAF抑制剂的临床研究在进行之中，给患者带来了新的希望。B-raf基因突变主要发生在第11号外显子和第15号外显子上，第15号外显子突变发生率占80％，其中第15号外显子的600位氨基酸密码子GTG突变占第15本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测人类B-raf基因突变的引物探针组合物，其特征在于：包括正向引物1、反向引物1和荧光探针1，所述正向引物1的序列如SEQ ID NO.1所示，所述反向引物1的序列如SEQ ID NO.2所示，所述荧光探针1的序列如SEQ ID NO.3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测人类B-raf基因突变的引物探针组合物，其特征在于：包括正向引物1、反向引物1和荧光探针1，所述正向引物1的序列如SEQIDNO.1所示，所述反向引物1的序列如SEQIDNO.2所示，所述荧光探针1的序列如SEQIDNO.3所示。


2.如权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于：还包括锁核酸探针1，所述锁核酸探针1的序列如SEQIDNO.4所示，其3’端连接有PO4基团。


3.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于：所述锁核酸探针1序列的第2、4、6、7、9、12、15、17个碱基进行LAN修饰。


4.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于：还包括正向引物2、反向引物2和荧光探针2，所述正向引物2的序列如SEQIDNO.5所示，所述反向引物2的序列如SEQIDNO.6所示，所述荧光探针2的序列如SEQIDNO.7所示。


5.如权利要求4所述的引物探针组合物，其特征在于：还包括锁核酸探针2，所述锁核酸探针2的序列如SEQIDNO.8所示，其序列的第3、7、9、10、11...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵平锋，
申请(专利权)人：武汉光谷联合医学检验所股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42