白头翁汤在制备增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了白头翁汤在制备增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10‑15份，黄柏5‑15份，秦皮15‑30份，白头翁15‑30份。本发明专利技术所述的白头翁汤显著增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力，效果显著。

Application of Baitouweng Decoction in the preparation of bactericidal drugs to enhance PMNs across endothelium

【技术实现步骤摘要】
白头翁汤在制备增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力药物中的应用
本专利技术涉及白头翁汤的新用途，特别涉及白头翁汤在制备保护LPS诱导RIMVECs损伤的药物中的应用。
技术介绍
嗜中性粒细胞是多形核白细胞(Polymorphonuclearleukocytes，PMNs)的一种，是机体抵御外来病原体微生物入侵的第一道防线，在抗细菌、真菌以及病毒等感染的疾病中起到至关重要的作用。在PMNs发挥杀菌作用的过程中，其释放的各种颗粒蛋白酶与PMNs的生物学功能有着密切的关系，例如防御素(defensins)、中性粒细胞丝氨酸蛋白酶(Neutrophilserineproteases，NSPs)、溶菌酶(Lysozyme)等[15,103]。NSPs是在PMNs胞质内的一种主要在细胞外发挥消化作用的酶，包括中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophilelastase，NE)、组织蛋白酶G(cathepsinG，CG)、蛋白酶3(protease3，PR3)以及中性粒细胞丝氨酸蛋白酶4(Neutrophilserineprotease4，NSP4)。当机体受到外源性刺激导致组织损伤或者有病原微生物入侵机体时，PMNs将从循环血液中进入组织，NSPs通过脱颗粒作用释放到胞外，进而在机体发生感染、炎症、组织损伤的部位发挥重要作用。致病性大肠杆菌能引起炎症、细胞凋亡，还能逃避宿主的免疫，相对应的治疗可以考虑抗炎、减少细菌诱导的细胞凋亡，增强天然免疫系统的杀菌作用等。在介导细胞凋亡的过程中起着至关重要的作用主要是Caspase家族，caspase-3是其中最关键的执行分子，它在涉及凋亡的多个信号传导通路中发挥重要作用，细胞凋亡增加以后天然免疫系统的功能会减弱，因此，减少细胞的凋亡能间接增强免疫细胞对细菌的杀灭。实验室前期研究发现内皮细胞的完整性是PMNs发挥杀菌功能的前提，而内皮细胞的完整性主要依靠细胞与细胞之前的连接，当细胞间的连接被毒素或其他致病因素破坏后，内皮细胞的完整性会被破坏导致其屏障功能受损并最终引起一系列的病理变化。血管内皮细胞钙粘蛋白(VE-cadherin)是内皮细胞间连接处的一种特殊连接蛋白，它能促进血管内皮细胞连接及维持血管内皮屏障功能，因此其在调控PMNs跨内皮杀菌中发挥关键作用。我国传统中药具有副作用小，整体治疗和调理的特点，能有效改善患者的病情。
技术实现思路
本专利技术目的在于公开一种中药组合物及其新用途。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的：白头翁汤在制备增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。所述的应用是指动物的细菌性腹泻。进一步的，所述的细菌性腹泻包括大肠杆菌感染，和/或内毒素感染、和/或热敏肠毒素感染、和/或溶血素感染，和/或志贺样毒素感染。优选的，所述的应用是保护RIMVECs、和/或降低caspase-3含量、和/或跨内皮迁移PMNs数量，和/或胞内外活菌数，和/或提高NE和CG释放量。白头翁汤的原料药及重量份为：黄连15份，黄柏10份，秦皮20份，白头翁20份；或黄连12份，黄柏15份，秦皮25份，白头翁20份，或黄连10份，黄柏10份，秦皮15份，白头翁20份。白头翁汤剂型为胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、散剂等口服制剂。白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮，滤过，浓缩，干燥，加辅料适量，混匀，分装。所述的白头翁汤的制备方法为：将原料药，加水浸泡20-60min，优选为30min，煎煮30min，过滤后收集药液后，加水继续煎煮30min，过滤，收集药液，加水继续煎煮30min，过滤，将3次所得的滤液合并，过滤浓缩至浓度为1g/mL，于80℃干燥箱内进行干燥，待药液烘干既得。还可以为：所述的白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮2次，第一次60min，第2次30min,滤过，浓缩，喷雾干燥，分装。还可以为：白头翁汤的制备方法为：全部药味加水煎煮，滤过，浓缩，加乙醇，醇沉，上清液挥去乙醇，浓缩，加辅料适量，干燥，混匀，制粒,分装。本专利技术所述的白头翁汤显著增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力，效果显著。附图说明：图1：大鼠外周血PMNs的提取A：PMNs吉姆萨染色(100x)B：PMNs台盼蓝染色(标尺＝100μm)；图2：大鼠外周血PMNs的流式鉴定；图3：跨内皮PMNs数量；图4：跨内皮PMNs杀菌情况；图5：跨内皮PMNs释放NE、CG含量的检测A：CG含量B：NE含量；图6：BCA蛋白浓度标准曲线；图7VE-cadherin和caspase-3相对表达量灰度值分析A：caspase-3灰度值分析B：VE-cadherin灰度值分析。具体实施方式下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。实施例1：称取黄连15g、黄柏10g、秦皮20g、白头翁20g，将称取好的中药材置于熬药罐中，加入足量蒸馏水浸泡30min，用武火(快火)煮沸后改为文火(慢火)继续煎煮30min，使用四层纱布趁热过滤后收集药液。向罐中剩余的药渣中加入足量蒸馏水，用武火煮沸后改为文火继续煎煮30min，用新的纱布趁热过滤，收集药液，重复上述步骤一次，最后将三次所得的滤液合并，用抽滤装置将合并的滤液进行抽滤以去掉残留的药渣。利用旋转蒸发仪将白头翁汤水煎液浓缩至65mL，使其浓度为1g/mL；将浓缩好的白头翁汤水煎液倒入干净的玻璃平皿中，于80℃干燥箱内进行干燥处理，待药液烘干后对其进行刮取得到白头翁汤的中药粉末，于室温冷却后称重，密封置于-20℃冰箱中保存备用,简称PD。实施例21.试验方法试验组:按照实施例1制得，简称PD。1.1大鼠外周血嗜中性粒细胞的分离提取1)SD大鼠心脏采血20mL左右，将血液与4％Dextran-T500/PBS4:1混合，4℃静置60min，得到上层白细胞悬浮液。2)当白细胞悬浮液<3mL时，加入大鼠外周血淋巴细胞分离液的量为3mL，当白细胞悬浮液>3mL时，加入等体积的大鼠外周血淋巴细胞分离液，但二者的总体积不能超过离心管的2/3，否则会影响分离效果。大鼠外周血淋巴细胞分离液先加在试管底部，再缓慢加入白细胞悬液，注意保持两液面界面清晰，水平转子700g离心25min，室温。3)离心后出现明显的分层(分层依次为血清，淋巴细胞及单核细胞，红细胞及粒细胞)，留取最下层的红细胞及粒细胞层，加入AKC缓冲液5mL(裂解红细胞)，轻轻吹匀，400g离心5min，室温。4)裂解完全后，加入分离液(含2％FBS的RPMI1640)5mL，洗两遍，400g离心5min，室温。5)用6mL45％Percoll轻轻重悬细胞，然后加入做好的81％和62％Percoll柱中离心。15本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.白头翁汤在制备增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。/n

【技术特征摘要】
1.白头翁汤在制备增强跨内皮迁移PMNs的杀菌能力的药物中的应用，所述白头翁汤的原料药及重量份为：黄连10-15份，黄柏5-15份，秦皮15-30份，白头翁15-30份。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的应用是指动物的细菌性腹泻。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的细菌性腹泻包括大肠杆菌感染，和/或内毒素感染、和/或热敏肠毒素感染、和/或溶血素感染，和/或志贺样毒素感染。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的应用是保护RIMVECs、和/或降低caspase-3含量、和/或跨内皮迁移PMNs数量，和/或胞内外活菌数，和/或提高NE和CG释放量。


5.如权利要求2所述的应用，其特征在于白头翁汤的原料药及重量份为：黄连15份，黄柏10份，秦皮20份，白头翁20份；或黄连12份，黄柏15份，秦皮25份，白头翁20份，或黄连10份，黄柏10份，秦皮15份，白头翁20份。


6.如权利要求1至5任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：董虹，刘晓晔，王芸，李秋月，贺尚文，穆祥，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11