一种高效制作琼脂糖凝胶的方法技术

本发明专利技术涉及一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其包含配制琼脂糖溶液、溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，所述溶解琼脂糖的方法为高压灭菌锅加热溶解，相对于传统水浴加热或微波炉加热溶解，操作简单方便灵活，实用性强，既能提高效率又可以保证安全性，且本发明专利技术制备的琼脂糖凝胶电泳后还可以回收，多次重复利用，降低科研成本。

An efficient method for producing agarose gel

【技术实现步骤摘要】
一种高效制作琼脂糖凝胶的方法
本专利技术涉及一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，属于生物技术研究领域。
技术介绍
琼脂糖凝胶电泳技术是一种常见的实验室技术，在分离蛋白、核酸等方面应用较广，尤其在分离纯化和鉴定核酸(DNA和RNA)方面最为普遍，该技术主要是以琼脂糖作为支持介质，当用低浓度的核酸染料染色后，在紫外光下至少可以检出1～10ng的核酸条带，从而可以确定核酸片段在凝胶中的位置。目前，一般琼脂糖凝胶的制备，是将琼脂糖通过微波炉加热溶解，自然冷却到60～70℃时，加入核酸染料，倒入胶床，插上梳子室温凝固40min后用于电泳，整个过程需50min左右。但市售的微波炉一般空间有限，若样品量较大，需重复溶胶。并且微波加热琼脂糖的时间较难掌控，时间太长容易变干，时间太短溶解不充分，同时琼脂糖微波加热过程中容易暴沸，对操作人员的经验要求特高。琼脂糖是从红藻中提取的链状中性多糖，是琼胶去除琼脂果胶的产物，1937年第一次从琼脂中分离琼脂糖之后发展至今，琼脂糖以其近似理想的凝胶特性，已成为现代生物技术科研领域不可或缺的凝胶基质。随着科研技术的进步，对琼脂糖的需求量也不断增大，国外对琼脂糖的研究远早于国内，已形成一系列产品，并占领了主要琼脂糖市场。由于国内生产的琼脂糖产品的品质不及国外同类产品，目前国内科研用的琼脂糖主要依赖国外进口，且进口的琼脂糖价格昂贵，所以每年我国需要投入相当大的资金用于进口，这使得我国生物技术研究成本高，不利于在国际市场上的竞争。因此，有必要研制出琼脂糖节约型利用策略，来降低我国生物技术研究成本。>为了克服上述现有琼脂糖凝胶制备效率低，以及琼脂糖的成本高的问题，开发一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，提高制胶效率和琼脂糖的利用率是很有必要的。
技术实现思路
针对现有技术问题，本专利技术提供了一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，该方法操作简单方便灵活，实用性强，既能提高效率又可以保证安全性，还可降低科研成本。本专利技术的通过以下技术方案实现：一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，包括配制琼脂糖溶液、溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，所述溶解琼脂糖方法为将配制好的琼脂糖溶液放置于高压灭菌锅内加热溶解。优选地，所述高压灭菌锅加热溶解温度为115℃～121℃，时间为20min～40min。优选地，所述琼脂糖溶液配制方法为称取琼脂糖置于玻璃瓶中，加入琼脂糖电泳缓冲液，配制成实验所需浓度的琼脂糖溶液，琼脂糖溶液体积不能超过玻璃瓶体积的1/2，用封口膜封住玻璃瓶口。所述琼脂糖溶液浓度据实验需要而变，一般在0.8％～2.0％之间。所述琼脂糖电泳缓冲液为实验室常用缓冲液，如：EDTA(pH8.0)、Tris-乙酸(TEA)、Tris-硼酸(TBE)或Tris-磷酸(TPE)等。优选地，可在加热溶解的琼脂糖溶液中加入核酸染料，所述核酸染料为Gelview、SYBRGreenI、UltrapowerTM、EB等常用核酸染料。核酸染料也可不加，可在电泳结束后染色。作为一种具体实施方式，所述制作琼脂糖凝胶的方法，包括以下步骤：(1)配制琼脂糖溶液：称取琼脂糖置于玻璃瓶中，加入琼脂糖电泳缓冲液，配制成实验所需浓度的琼脂糖溶液，琼脂糖溶液体积不能超过玻璃瓶体积的1/2，用封口膜封住玻璃瓶口。(2)溶解琼脂糖：将配制好的琼脂糖溶液放入高压灭菌锅，115℃～121℃高压20min～40min，待温度降到60℃～70℃时取出，加入核酸染料，并轻轻混匀。或将琼脂糖凝胶放于60℃～70℃烘箱备用。(3)铺胶：取出洗净并晒干的胶床，将步骤2制得琼脂糖溶液均匀地倒入胶床内，插上梳子。(4)凝固成型获得琼脂糖凝胶：室温静置30～40min，充分凝固后，垂直拔下梳子，将带琼脂糖凝胶的胶床置于电泳槽中进行电泳。或将琼脂糖凝胶与胶床分开，用保鲜膜包裹后放于4℃冰箱备用。本专利技术另一方面还提供了一种再生琼脂糖凝胶的方法：收集电泳完的琼脂糖凝胶块放入玻璃瓶，重复上述步骤2～步骤4所述的溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，可再次制作出新的琼脂糖凝胶。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术利用高压灭菌锅溶解琼脂糖，避免了琼脂糖因微波炉温度急剧升高引起溶液暴沸的情况。2、本专利技术相当于自动化溶解琼脂糖凝胶，只需人工配置好一定浓度的琼脂糖溶液，后续放入高压锅自动加热溶解，相对于传统的溶解方法，节约了实验人员大量时间。3、本专利技术产量高。一个30L容积的高压灭菌锅通常最多可以高压溶解3000mL左右的琼脂糖，这样在20min～40min内就可完成3000mL琼脂糖的溶解工作。通过本专利技术，还可将溶解好的琼脂糖放入60℃～70℃烘箱中备用，防止琼脂糖凝固，有效提高了琼脂糖凝胶的获得率。4、本专利技术操作灵活简单，实验人员可根据实验室实际胶床的数量，完成一次性溶胶，灵活安排铺胶和电泳时间，甚至利用本专利技术方法，一次性配制好大量凝胶，后续无需重复制胶，待实验样品制备好后，可直接电泳。5、本专利技术将琼脂凝胶多次回收利用，提高了琼脂糖的利用率，降低了科研成本。具体实施方式本专利技术提供了一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术内。下面结合具体实施例，对本专利技术做进一步说明。以下实施例涉及到的耗材、试剂和设备均为市售。TAE电泳缓冲液按如下方法配制：一般先配制50倍的TAE缓冲液，用时再稀释成1倍，50倍TAE电泳缓冲液的配制方法为：1)称取Tris试剂242g，Na2EDTA.2H2O试剂37.2g于1L烧杯中；2)向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分搅拌溶解；3)加入57.1mL的醋酸，充分搅拌；4)加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。实施例1点样孔为3000个、厚度为3mm的2％琼脂糖凝胶制作(1)配制2％琼脂糖溶液：称取10g的琼脂糖置于了1L三角玻璃瓶中，加入500mLTAE电泳缓冲液，用封口膜封住三角玻璃瓶口，配制6瓶。(2)溶解琼脂糖：将配制好的琼脂糖溶液放入高压灭菌锅，121℃高压20min，待温度降到70℃时取出，取1瓶琼脂糖溶液，加入50μLGelview核酸染料，并轻轻混匀。其余琼脂糖溶液放于70℃烘箱备用。(3)铺胶：取出洗净并晒干的胶床(长200mm*宽160mm)10块，将步骤2制得琼脂糖溶液均匀地倒入胶床内(每个胶床倒入100mL凝胶)，每块胶插上4把25孔梳子。(4)1000个点样孔2％凝胶获得：室温静置30min充分凝固后，垂直拔下梳子，将凝胶与胶床分开，用保鲜膜包裹住放于4℃冰箱备用。(5)2000个点样孔2％凝胶获得：将上述的胶床洗净擦干，重复步骤3和步骤4。(6)3000个点样孔2％凝胶获得：重复步骤3和步骤4。(7)再生琼脂糖凝胶的制备：将每次电泳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，包括配制琼脂糖溶液、溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，其特征在于，所述溶解琼脂糖方法为将配制好的琼脂糖溶液放置于高压灭菌锅内加热溶解。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，包括配制琼脂糖溶液、溶解琼脂糖、铺胶、凝固成型获得琼脂糖凝胶步骤，其特征在于，所述溶解琼脂糖方法为将配制好的琼脂糖溶液放置于高压灭菌锅内加热溶解。


2.如权利要求1所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，所述高压灭菌锅加热溶解温度为115℃～121℃，时间为20min～40min。


3.如权利要求1所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，所述配制琼脂糖溶液方法为称取琼脂糖置于玻璃瓶中，加入琼脂糖电泳缓冲液，配制成实验所需浓度的琼脂糖溶液，琼脂糖溶液体积不能超过玻璃瓶体积的1/2，用封口膜封住玻璃瓶口。


4.如权利要求1至4任一项所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，可在加热溶解的琼脂糖溶液中加入核酸染料。


5.如权利要求1所述一种高效制作琼脂糖凝胶的方法，其特征在于，包括以...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玲，殷富有，钟巧芳，程在全，王波，张敦宇，陈越，付坚，柯学，王玲仙，余腾琼，肖素勤，蒋聪，
申请(专利权)人：云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53